目的在大腸埃希菌（E. coli）中表達(dá)結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）Rv0674蛋白,純化后制備多克隆抗體,并檢測抗體效價。方法用PCR技術(shù)從MTB H37Rv基因組中擴增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表達(dá)載體后,轉(zhuǎn)化入E. coli BL21（DE3）中,用優(yōu)化后的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)條件表達(dá)Rv0674蛋白,His trap TM HP親和層析柱純化目的蛋白;將純化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制備多克隆抗體,ELISA和Western blot法檢測抗體效價及特異性。結(jié)果成功獲得了Rv0674序列正確的重組質(zhì)粒p EASY-E1-Rv0674,挑選出了高表達(dá)Rv0674基因的菌株,確定的最適表達(dá)條件為1. 0 mmol/L IPTG 28℃誘導(dǎo)表達(dá)8 h,獲得了相對分子質(zhì)量約26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠產(chǎn)生多克隆抗體,獲得的抗血清具有良好的抗原結(jié)合特性,且效價大于1∶51 200。結(jié)論成功獲得了高純度的Rv0674蛋白,并首次制備出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗體,為進(jìn)一步研究Rv... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2019,32(12)CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、質(zhì)粒及基因組
    1.2 實驗動物
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 溶液配制
        1.4.1 裂解（上樣）緩沖液（SPB)
        1.4.2 清洗液（CEPB)
        1.4.3 洗脫緩沖（EPB)
        1.4.4 封閉液
        1.4.5 LB液體培養(yǎng)基
    1.5 引物設(shè)計及合成
    1.6 Rv0674基因的擴增
    1.7 Rv0674蛋白重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.8 Rv0674蛋白重組表達(dá)菌株的構(gòu)建
    1.9 Rv0674蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    1.1 0 目的蛋白表達(dá)形式分析及Western blot鑒定
    1.1 1 重組蛋白的純化
    1.1 2 抗小鼠血清的制備
    1.1 3 抗體效價的檢測
    1.1 4 抗體特異性鑒定
2 結(jié)果
    2.1 Rv0674基因擴增產(chǎn)物的鑒定
    2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒pEASY-E1-Rv0674的鑒定
    2.3 Rv0674蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.4 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
    2.5 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.6 小鼠血清抗體效價
    2.7 抗體特異性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]十六個結(jié)核分枝桿菌新抗原的抗原表位鑒定與評價[D]. 王雪枝.中國疾病預(yù)防控制中心 2017



本文編號：3634829