目的:本研究主要是通過(guò)RNA干擾技術(shù)將si RNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入荷瘤小鼠的體內(nèi),從而下調(diào)PD-1和CTLA-4在荷瘤小鼠體內(nèi)的表達(dá),進(jìn)而探討共抑制PD-1和CTLA-4的表達(dá)對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。方法:將鼠源的H22肝癌細(xì)胞在ICR品系的小鼠腹腔內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)并連續(xù)傳代三次,再在另一只ICR品系的小鼠的右前肢腋下建立移植腫瘤動(dòng)物模型。將成功荷瘤的小鼠隨機(jī)分為四組:對(duì)照組（CT組）、si PD-1轉(zhuǎn)染組（si PD-1組）、si CTLA-4轉(zhuǎn)染組（si CTLA-4組）和聯(lián)合轉(zhuǎn)染組（si PD-1+si CTLA-4組）,使得每組荷瘤小鼠的腫瘤體積的大小基本保持一致。本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)給每只荷瘤小鼠注射si RNAs和動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)中每日觀察小鼠的存活時(shí)間和基本的生理狀況。測(cè)量實(shí)體瘤的體積和重量以評(píng)估si RNAs對(duì)腫瘤的抑制作用。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)荷瘤小鼠血液中IFN-γ和IL-10的含量以及腫瘤組織和肝臟組織中PD-L1蛋白的表達(dá)量。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（q PCR技術(shù)）檢測(cè)腫瘤組織中IFN-γ、PD-L1、IL-6和Survivin,肝... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

siPD-1 和 siCTLA-4 對(duì)荷瘤小鼠 H22移植瘤的抗腫瘤作用

圖 2 ELISA 對(duì)荷瘤小鼠血清中 IFN-γ, IL-10 和組織中 PD-L1 蛋白表達(dá)含量的檢測(cè)結(jié)果圖 2AIFN-γ 在荷瘤小鼠血清中的表達(dá)含量 圖 2B IL-10 在荷瘤小鼠血清中的表達(dá)含量圖 2C PD-L1 蛋白在荷瘤小鼠腫瘤組織中的表達(dá)含量 圖 2D PD-L1 蛋白在荷瘤小鼠肝臟組織的表達(dá)含量 與對(duì)照組相比之下，荷瘤小鼠血清中 IFN-γ，IL-10 和小鼠組織中 PD-L1 蛋白的達(dá)含量的檢測(cè)結(jié)果顯示出顯著地差異(**: P<0.01, *: P <0.05)。4 組織中相關(guān)基因 mRNA 表達(dá)的測(cè)定

Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)量由WesternBlot技術(shù)分析測(cè)定


本文編號(hào)：3625234