生物大分子（如蛋白質(zhì)）的結(jié)構(gòu)與功能研究是現(xiàn)代生物學的重要研究領(lǐng)域。定點自旋標記結(jié)合電子順磁共振（Site-Directed Spin Labeling ElectronParamagnetic Resonance，SDSL-EPR）技術(shù)是目前可以在生理環(huán)境下研究蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的主要方法之一。SDSL-EPR技術(shù)利用SDSL技術(shù)在生物分子內(nèi)的目的位點選擇性地標記上含有未偶自旋的氮氧自由基，再通過EPR技術(shù)測量未偶自旋的波譜狀態(tài)，通過波譜解析，可以獲得標記位點的運動狀態(tài)和兩個未偶自旋間的距離及其變化。其距離測量方法的特點是測距范圍寬，受其它因素影響小，對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化分析更加有效。SDSL-EPR可研究溶液中類似生理環(huán)境下的蛋白質(zhì)，更加適合用于測量結(jié)構(gòu)變化的動態(tài)過程，解決了許多生物學研究中的難點問題，例如難以獲得結(jié)晶的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析、膜蛋白和大分子蛋白復(fù)合體的構(gòu)象分析、溶液狀態(tài)下蛋白質(zhì)的動態(tài)變化、蛋白質(zhì)之間和蛋白質(zhì)與膜之間的相互作用等。SDSL-EPR距離測量方法目前仍然存在一些問題：由于生物樣品的多樣性，實際測量中許多因素都可能引起連續(xù)波電子順磁共振（Continues Wave ... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
第一章 EPR 距離測量原理及其應(yīng)用
    1 定點自旋標記技術(shù)（SDSL）
    2 EPR 距離測量原理
        2.1 偶極-偶極耦合作用
        2.2 EPR 距離計算方法
            2.2.1 CW-EPR 距離計算方法
            2.2.2 Pulsed EPR 距離計算方法
            2.2.3 CW-EPR 與 Pulsed EPR 比較
    3 EPR 距離測量在生物研究中的應(yīng)用
        3.1 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究
        3.2 蛋白質(zhì)相互作用
        3.3 核酸分子研究
        3.4 長距離的測量應(yīng)用
第二章 連續(xù)波 EPR 距離計算軟件
    1 軟件簡介
    2 波譜擬合
        2.1 各類型實驗譜擬合
        2.2 波譜反擬合程序
        2.3 高斯擬合程序
        2.4 擬合過程的方法改進
    3 距離計算
        3.1 增寬函數(shù)的擬合
        3.2 波譜中心點的選擇
    4 本章總結(jié)
第三章 雙自旋距離刻度分子標尺
    1 標尺分子的設(shè)計
    2 C60單/雙自旋分子的合成與鑒定
        2.1 材料與方法
            2.1.1 主要分析儀器
            2.1.2 C60單/雙加成化合物的合成及分離
            2.1.3 C60單/雙自旋化合物的合成與鑒定
        2.2 結(jié)果與討論
            2.2.1 紫外吸收譜
            2.2.2 室溫 CW-EPR 實驗
            2.2.3 穩(wěn)定性實驗
        2.3 小結(jié)
    3 標尺分子距離測量實驗
        3.1 材料與方法
            3.1.1 設(shè)備與材料
            3.1.2 實驗方法
        3.2 結(jié)果與分析
            3.2.1 不同溫度下 C60單/雙自旋分子 EPR 波譜
            3.2.2 不同濃度下 C60單/雙自旋分子 EPR 波譜
            3.2.3 不同溶劑下 C60單/雙自旋分子 EPR 波譜
            3.2.4 微波功率對 C60單/雙自旋分子 EPR 波譜的影響
            3.2.5 本底信號
        3.3 小結(jié)
    4 距離刻度實驗及刻度標尺的建立
        4.1 不同濃度下波譜增寬效應(yīng)與雙基間距離的關(guān)系
        4.2 不同溫度下波譜增寬效應(yīng)與雙基間距離的關(guān)系
        4.3 不同功率下波譜增寬效應(yīng)與雙基間距離的關(guān)系
        4.4 不同溶劑下波譜增寬效應(yīng)與雙基間距離的關(guān)系
    5 本章總結(jié)
第四章 距離測量蛋白質(zhì)實驗?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建
    1 單/雙 Cys 點突變 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)模型的設(shè)計
    2 膜蛋白 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域（野生型）的表達
        2.1 實驗材料與設(shè)備
            2.1.1 實驗材料
            2.1.2 主要試劑與設(shè)備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 載體構(gòu)建
            2.2.2 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域蛋白的誘導表達
            2.2.3 SDS-PAGE 檢測
            2.2.4 Western blotting 檢測
            2.2.5 透射電鏡檢測
            2.2.6 生物功能檢測
            2.2.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 原核表達載體構(gòu)建
            2.3.2 常規(guī)原核表達載體蛋白表達結(jié)果
            2.3.3 Tat-hLSECtin-CRD 蛋白表達結(jié)果
            2.3.4 細胞亞顯微結(jié)構(gòu)
            2.3.5 Tat-hLSECtin-CRD 生物功能檢測結(jié)果
            2.3.6 小結(jié)
    3 單/雙 Cys 點突變 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域蛋白的表達與純化
        3.1 材料與設(shè)備
        3.2 實驗方法
            3.2.1 單/雙 Cys 點突變的引入
            3.2.2 原核載體表達與純化
            3.2.3 真核載體表達與純化
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 單/雙 Cys 點突變 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域蛋白的原核表達與純化
            3.3.2 單/雙 Cys 點突變 hLSECtin-CRD 結(jié)構(gòu)域蛋白的真核表達與純化
    4 本章總結(jié)
第五章 總結(jié)與討論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]電磁脈沖對大鼠肝臟線粒體膜流動性及脂質(zhì)過氧化的影響[J]. 王長振,叢建波,先宏,曹曉哲,孫存普,吳可.  中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2002(04)
[4]中國地鼠肺正常細胞V79和癌變細胞V79-B1膜上巰基結(jié)合位置的性質(zhì)[J]. 忻文娟,趙保路,張建中.  中國科學（B輯 化學 生物學 農(nóng)學 醫(yī)學 地學）. 1984(05)



本文編號：3618225