目的制備廣州管圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)粗抗原、排泄分泌粗抗原、成蟲(chóng)粗抗原、幼蟲(chóng)純化抗原和成蟲(chóng)純化抗原功能化納米金棒,篩選廣州管圓線蟲(chóng)功能化納米金棒診斷抗原及最適宜濃度,證實(shí)功能化納米金棒能夠檢測(cè)早期或低度感染的廣州管圓線蟲(chóng)血清抗體。方法1.金晶種子生長(zhǎng)法聚合徑長(zhǎng)比可控的納米金棒。2.液氮研磨法制備廣州管圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)粗抗原和成蟲(chóng)粗抗原、RPMI-1640培養(yǎng)法制備排泄分泌粗抗原、聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）制備幼蟲(chóng)純化抗原和成蟲(chóng)純化抗原。巰基化粗抗原、純化抗原與納米金棒結(jié)合,制備功能化納米金棒。采用紫外分光光度計(jì)掃描,通過(guò)比較表面等離子共振吸收峰的紅峰移位大小,優(yōu)選出功能化納米金棒最適包被濃度。3.廣州管圓線蟲(chóng)功能化納米金棒檢測(cè)不同感染時(shí)間、不同感染度及不同稀釋度的大鼠血清抗體,根據(jù)表面等離子共振吸收峰紅峰移位的變化篩選出廣州管圓線蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)診斷抗原。4.廣州管圓線蟲(chóng)功能化納米金棒檢測(cè)不同感染時(shí)間、不同感染度、不同稀釋度血清抗體與ELISA檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行比較,探索功能化納米金棒檢測(cè)的敏感性和靈敏度。結(jié)果1.成功制備廣州管圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)粗抗原、成蟲(chóng)粗抗原、排泄分泌粗抗原、幼蟲(chóng)純化抗原和成蟲(chóng)純化抗原功能... 

【文章來(lái)源】：大理大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－６排泄分泌粗抗原制備??

廣州管圓線蟲(chóng)功能化納米金棒抗原篩選及血清學(xué)診斷的基礎(chǔ)研％??ＰＥＧ－６０００濃縮，收集排泄分泌粗抗原于冷凍干燥機(jī)內(nèi)高度濃縮成排泄分泌粗抗??原凍干粉。（圖１－６）??１．２．５成蟲(chóng)粗抗原制備［２７］將－２ＣＴＣ凍存的成蟲(chóng)加少許的液氮研磨粉末，丙酮脫月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反復(fù)研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??離心３０ｍｉｎ，上清液即為成蟲(chóng)粗抗原。??圖１－１糞便分離Ｉ期幼蟲(chóng)?圖１－２中間宿主?圖１－３?ＩＩＩ期幼蟲(chóng)??ｉＭｍ??圖１－４幼蟲(chóng)?圖１－５?（ａ）肺動(dòng)脈血管分離成蟲(chóng)?（ｂ）成蟲(chóng)??議??圖１－６排泄分泌粗抗原制備??１．２．６純化抗原制備采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）純化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠的制備按照目的蛋白分子量配制１０％分離膠和５％濃縮??膠，分離膠一般灌注量為４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液槍快速用純水壓平膠面，室??１３??

廣州管圓線蟲(chóng)功能化納米金棒抗原篩選及血清學(xué)診斷的基礎(chǔ)研％??ＰＥＧ－６０００濃縮，收集排泄分泌粗抗原于冷凍干燥機(jī)內(nèi)高度濃縮成排泄分泌粗抗??原凍干粉。（圖１－６）??１．２．５成蟲(chóng)粗抗原制備［２７］將－２ＣＴＣ凍存的成蟲(chóng)加少許的液氮研磨粉末，丙酮脫月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反復(fù)研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??離心３０ｍｉｎ，上清液即為成蟲(chóng)粗抗原。??圖１－１糞便分離Ｉ期幼蟲(chóng)?圖１－２中間宿主?圖１－３?ＩＩＩ期幼蟲(chóng)??ｉＭｍ??圖１－４幼蟲(chóng)?圖１－５?（ａ）肺動(dòng)脈血管分離成蟲(chóng)?（ｂ）成蟲(chóng)??議??圖１－６排泄分泌粗抗原制備??１．２．６純化抗原制備采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）純化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠的制備按照目的蛋白分子量配制１０％分離膠和５％濃縮??膠，分離膠一般灌注量為４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液槍快速用純水壓平膠面，室??１３??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2010～2016年大理地區(qū)廣州管圓線蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)病例分析[J]. 李天美,陳鳳,方文,陳紹榮,李婷,李科榮,劉榆華,羅家軍.  熱帶病與寄生蟲(chóng)學(xué). 2017(03)
[2]納米金標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于病原生物檢測(cè)的研究[J]. 曹穎,李家萌,趙媛,楊毅梅.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2016(03)
[3]固相金納米棒光學(xué)免疫傳感器對(duì)血吸蟲(chóng)病早期診斷價(jià)值的研究[J]. 何鑫,汪世平,周云飛,黃成銘,吳朝陽(yáng),沈國(guó)勵(lì).  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2015(10)
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[6]膠體金免疫層析法檢測(cè)廣州管圓線蟲(chóng)感染小鼠血清特異性抗體的研究[J]. 郝振華,黃慧聰,譚峰,梁韶暉.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2013(11)
[7]廣州管圓線蟲(chóng)V期幼蟲(chóng)cDNA表達(dá)文庫(kù)中優(yōu)勢(shì)診斷抗原的篩選、鑒定和克隆[J]. 陳婧,楊瀟,劉茜,詹希美,何藹.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2013(01)
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[10]納米金粒子的理化性質(zhì)、制備及修飾技術(shù)和應(yīng)用研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]. 袁帥,劉崢,馬肅.  材料導(dǎo)報(bào). 2012(09)

博士論文
[1]基于金納米顆粒標(biāo)記的ICP-MS病原細(xì)菌檢測(cè)方法及應(yīng)用研究[D]. 王秀季.中國(guó)地質(zhì)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]納米金棒的優(yōu)化聚合及應(yīng)用于血吸蟲(chóng)病檢測(cè)的基礎(chǔ)研究[D]. 李家萌.大理大學(xué) 2017
[2]納米金棒標(biāo)記旋毛蟲(chóng)診斷抗原的篩選及應(yīng)用于血清學(xué)診斷的研究[D]. 曹穎.大理大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3571419