目的制備廣州管圓線蟲幼蟲粗抗原、排泄分泌粗抗原、成蟲粗抗原、幼蟲純化抗原和成蟲純化抗原功能化納米金棒,篩選廣州管圓線蟲功能化納米金棒診斷抗原及最適宜濃度,證實功能化納米金棒能夠檢測早期或低度感染的廣州管圓線蟲血清抗體。方法1.金晶種子生長法聚合徑長比可控的納米金棒。2.液氮研磨法制備廣州管圓線蟲幼蟲粗抗原和成蟲粗抗原、RPMI-1640培養(yǎng)法制備排泄分泌粗抗原、聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）制備幼蟲純化抗原和成蟲純化抗原。巰基化粗抗原、純化抗原與納米金棒結(jié)合,制備功能化納米金棒。采用紫外分光光度計掃描,通過比較表面等離子共振吸收峰的紅峰移位大小,優(yōu)選出功能化納米金棒最適包被濃度。3.廣州管圓線蟲功能化納米金棒檢測不同感染時間、不同感染度及不同稀釋度的大鼠血清抗體,根據(jù)表面等離子共振吸收峰紅峰移位的變化篩選出廣州管圓線蟲的優(yōu)勢診斷抗原。4.廣州管圓線蟲功能化納米金棒檢測不同感染時間、不同感染度、不同稀釋度血清抗體與ELISA檢測的結(jié)果進行比較,探索功能化納米金棒檢測的敏感性和靈敏度。結(jié)果1.成功制備廣州管圓線蟲幼蟲粗抗原、成蟲粗抗原、排泄分泌粗抗原、幼蟲純化抗原和成蟲純化抗原功能... 

【文章來源】：大理大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－６排泄分泌粗抗原制備??

廣州管圓線蟲功能化納米金棒抗原篩選及血清學(xué)診斷的基礎(chǔ)研％??ＰＥＧ－６０００濃縮，收集排泄分泌粗抗原于冷凍干燥機內(nèi)高度濃縮成排泄分泌粗抗??原凍干粉。（圖１－６）??１．２．５成蟲粗抗原制備［２７］將－２ＣＴＣ凍存的成蟲加少許的液氮研磨粉末，丙酮脫月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反復(fù)研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??離心３０ｍｉｎ，上清液即為成蟲粗抗原。??圖１－１糞便分離Ｉ期幼蟲?圖１－２中間宿主?圖１－３?ＩＩＩ期幼蟲??ｉＭｍ??圖１－４幼蟲?圖１－５?（ａ）肺動脈血管分離成蟲?（ｂ）成蟲??議??圖１－６排泄分泌粗抗原制備??１．２．６純化抗原制備采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）純化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠的制備按照目的蛋白分子量配制１０％分離膠和５％濃縮??膠，分離膠一般灌注量為４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液槍快速用純水壓平膠面，室??１３??

廣州管圓線蟲功能化納米金棒抗原篩選及血清學(xué)診斷的基礎(chǔ)研％??ＰＥＧ－６０００濃縮，收集排泄分泌粗抗原于冷凍干燥機內(nèi)高度濃縮成排泄分泌粗抗??原凍干粉。（圖１－６）??１．２．５成蟲粗抗原制備［２７］將－２ＣＴＣ凍存的成蟲加少許的液氮研磨粉末，丙酮脫月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反復(fù)研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??離心３０ｍｉｎ，上清液即為成蟲粗抗原。??圖１－１糞便分離Ｉ期幼蟲?圖１－２中間宿主?圖１－３?ＩＩＩ期幼蟲??ｉＭｍ??圖１－４幼蟲?圖１－５?（ａ）肺動脈血管分離成蟲?（ｂ）成蟲??議??圖１－６排泄分泌粗抗原制備??１．２．６純化抗原制備采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）純化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠的制備按照目的蛋白分子量配制１０％分離膠和５％濃縮??膠，分離膠一般灌注量為４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液槍快速用純水壓平膠面，室??１３??

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]納米金標記技術(shù)應(yīng)用于病原生物檢測的研究[J]. 曹穎,李家萌,趙媛,楊毅梅.  中國病原生物學(xué)雜志. 2016(03)
[3]固相金納米棒光學(xué)免疫傳感器對血吸蟲病早期診斷價值的研究[J]. 何鑫,汪世平,周云飛,黃成銘,吳朝陽,沈國勵.  中國病原生物學(xué)雜志. 2015(10)
[4]膠體金制備技術(shù)的改進與優(yōu)化[J]. 劉穎沙,李建科,張琳,劉美慧.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2015(11)
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博士論文
[1]基于金納米顆粒標記的ICP-MS病原細菌檢測方法及應(yīng)用研究[D]. 王秀季.中國地質(zhì)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]納米金棒的優(yōu)化聚合及應(yīng)用于血吸蟲病檢測的基礎(chǔ)研究[D]. 李家萌.大理大學(xué) 2017
[2]納米金棒標記旋毛蟲診斷抗原的篩選及應(yīng)用于血清學(xué)診斷的研究[D]. 曹穎.大理大學(xué) 2017



本文編號：3571419