目的復(fù)制8J·cm-2UVA輻射損傷HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡模型,探究線(xiàn)粒體解偶聯(lián)蛋白2（uncoupling protein 2,UCP2）在UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡中的調(diào)控作用,確定線(xiàn)粒體解偶聯(lián)蛋白2對(duì)活性氧的調(diào)控,從線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合酶、活性氧（ROS）、線(xiàn)粒體解偶聯(lián)蛋白2（UCP2）、細(xì)胞色素C（cytoC）、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf^-1)的角度,研究扇貝多肽（polypeptide from Chlamys farreri, PCF）保護(hù)UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法復(fù)制8J·cm-2 UVA照射HaCaT細(xì)胞后18h的最佳凋亡模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為:對(duì)照組、UVA模型組、PCF組(5.69, 2.84, 1.42 mmol·L^-1PCF)、抑制劑組(5mmol·L^-1 NAC)。采用瓊脂糖凝膠電泳法和Hochest 33258熒光染色觀察UVA引起的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡率;2,7-二氯氫化熒光素二酯熒光探針,檢測(cè)PCF對(duì)UVA損傷細(xì)胞后ROS生成量的影響; RT-PCR檢測(cè)胞漿... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCF和抑制劑對(duì)UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞DNA片段形成的影響

圖2.2 PCF對(duì)UVA誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化的影響（x ±s, n=3）A:正常細(xì)胞對(duì)照組；B:模型組；C:1.42 mmol/L PCF 組；D:2.84 mmol/L PCF 組；E: 5.69 mmol/LPCF 組；F: NAC 組2.3.2 PCF 對(duì) UVA 誘導(dǎo)的 HaCaT 細(xì)胞凋亡的影響2.3.2.1 western blot 檢測(cè) PCF 上調(diào) Cu-Zn-SOD 蛋白表達(dá)抑制 HaCaT 細(xì)胞凋亡Western blot 檢測(cè) UVA 照射后 HaCaT 細(xì)胞胞漿中 Cu-ZnSOD 蛋白表達(dá)水平高低，用 Cu-ZnSOD 與 β-actin 光密度比值表示其表達(dá)水平的高低，所得結(jié)果如圖 2.3UVA 照射后繼續(xù)培養(yǎng) 18h，提取總蛋白進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：UVA 模型組 Cu-ZnSOD的表達(dá)水平有顯著地下降，與正常對(duì)照組細(xì)胞的表達(dá)量相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

.3 PCF 對(duì) UVA 輻射的 HaCaT 細(xì)胞內(nèi) Cu,Zn-SOD 蛋白表達(dá)的影響( x ± s，對(duì)照組；2—UVA輻射模型組；3—5.69 mmol/LPCF組；4—2.84 mmol/LPCF組mmol/LPCF組；0.01 與對(duì)照組比較；bP<0.01 與 UVA 模型組比較；cP<0.05 與 UVA+5.68 mm組比較；dP<0.05 與 UVA+2.84 mmol·L-1PCF 組比較2 RT-PCR 檢測(cè) PCF 對(duì) CAT 的調(diào)控A 輻射損傷后繼續(xù)培養(yǎng) 18h 然后收集細(xì)胞，提取 RNA，反轉(zhuǎn)錄成 cCR 擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增結(jié)果良好，沒(méi)有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)以及和引物二聚見(jiàn)圖2.4，CAT基因濃度/內(nèi)參GAPDH基因濃度比值表示CAT的基因可以看出：UVA 輻射模型組中的 CAT 基因表達(dá)量明顯降低，與對(duì)照著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P<0.01)；各劑量 PCF 組 CAT mRNA 的表達(dá)量均有

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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