發(fā)布時間：2022-01-02 04:13

　　背景許多促血管生成因子、血管生成因子和抗血管生成因子參與了糖尿病視網(wǎng)膜病變（Diabetic retinopathy,DR）的發(fā)病和進展。結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor,CTGF）作為一種細胞基質(zhì)調(diào)節(jié)因子,在細胞的增殖、黏附、遷移以及血管生成、炎癥反應(yīng)和組織重構(gòu)等生理、病理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。近年來,CTGF與糖尿病及其并發(fā)癥的關(guān)系逐漸受到重視,但CTGF在DR中的作用和機制尚未完全闡明。目的克隆人CTGF基因cDNA,構(gòu)建重組表達載體pCTGF并轉(zhuǎn)染人胚腎293（HEK293）細胞,檢測轉(zhuǎn)染細胞中重組CTGF基因和蛋白的表達及對細胞增殖的影響,為制備CTGF抗體、進行CTGF表達調(diào)控和功能研究奠定實驗基礎(chǔ)。方法根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中人CTGF的基因序列,設(shè)計特異性引物,以人胚肺成纖維HFL-I細胞cDNA為模板,通過PCR反應(yīng)擴增CTGF基因并進行測序驗證;將序列驗證正確的CTGF cDNA基因克隆到真核表達載體pEGFP,將通過雙酶切鑒定正確的表達載體命名為p-CTGF并轉(zhuǎn)染HEK293細胞,MTT法檢測表達載體對HEK2... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

真核表達載體pEGFP的質(zhì)粒圖譜示意圖

圖 2 真核表達載體 pCTGF 的質(zhì)粒構(gòu)建過程養(yǎng)及轉(zhuǎn)染復(fù)蘇線滅菌超凈工作臺及細胞間 30 min，并將完全培養(yǎng)基 DMEM期凍存細胞投入 370C 水浴鍋中，不斷晃動，使之快速融粒時，酒精消毒后轉(zhuǎn)入超凈工作臺中；胞懸液轉(zhuǎn)移至 10 mL 的離心管中，加入 3 倍體積的完全 DM平離心 5 min；離心一次，調(diào)整合適細胞密度，放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)，370C、5取細胞前，做好防護措施以防液氮濺落凍傷；快，取完細胞及時蓋好液氮罐，防止液氮過多揮發(fā)；

提取的細胞總RNA電泳圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清TGF-β1、CTGF與增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)系[J]. 魏菁,張明華.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2018(07)
[2]CTGF在多囊卵巢綜合征中的表達及對卵巢顆粒細胞增殖凋亡的影響研究[J]. 高雪,張悅,李霞.  臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志. 2017(17)
[3]CTGF siRNA轉(zhuǎn)染對體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞株B3轉(zhuǎn)分化的抑制作用（英文）[J]. 莊華,鄭凝旋,巫婧,徐巍,胡建章,謝茂松,郭建,徐國興.  國際眼科雜志. 2017(08)
[4]TGF-β1在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的作用[J]. 趙帥,尹妮.  中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志. 2017(01)
[5]結(jié)締組織生長因子在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的調(diào)控機制及研究進展[J]. 梁曦達,王光,陳曉隆.  國際眼科雜志. 2016(04)
[6]糖尿病心肌病與結(jié)締組織生長因子關(guān)系的探討[J]. 許麗娟,楊玉芝,馮琨.  黑龍江醫(yī)藥科學(xué). 2011(06)
[7]RNA干擾沉默CTGF對牛角膜內(nèi)皮細胞增殖的影響[J]. 張紅旭,陳宏,張惠成,董映.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2011(12)
[8]CTGFsiRNA改善STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜細胞凋亡（英文）[J]. 楊宏偉,陳曉隆,劉哲麗,劉潔,卜立敏.  國際眼科雜志. 2010(05)
[9]PPAR-γ及CTGF對肝癌細胞生長的影響及相互作用的研究[J]. 蔡瑋,張芳,劉偉,楊愛軍,王晨昱,李敏.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2010(04)
[10]增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變玻璃體中結(jié)締組織生長因子的定量分析[J]. 李盛國,譚湘蓮,李湘黔.  眼科新進展. 2009(05)



本文編號：3563450