發(fā)布時間：2021-12-30 13:55

　　本課題將Ipr1 （Intracellular pathogen resistance 1,細(xì)胞內(nèi)病原體抗性基因1）克隆入原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a（+）,構(gòu)建了原核基因表達(dá)質(zhì)粒pET32a（+）-Ipr1,并成功獲得Ipr1重組蛋白;將Ipr1基因與結(jié)核分枝桿菌PPE68基因分別克隆入真核表達(dá)載體pBudCE4.1中,構(gòu)建真核共表達(dá)質(zhì)粒（pbudce4.1/ Ipr1/PPE68）,體外轉(zhuǎn)染小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞,并在轉(zhuǎn)錄水平及翻譯水平鑒定了Ipr1基因和PPE68基因的表達(dá);同時構(gòu)建了Ipr1基因和PPE68基因共表達(dá)穿梭質(zhì)粒（pbudce4.1-Ipr1-PPE68-OriM）,并將該質(zhì)粒電轉(zhuǎn)到BCG中,構(gòu)建Ipr1/ PPE68重組BCG,為進(jìn)一步研究Ipr1/PPE68重組BCG對結(jié)核分枝桿菌感染的免疫保護(hù)作用打下基礎(chǔ)。第一部分Ipr1基因原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定目的:構(gòu)建Ipr1基因原核表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)和鑒定。方法: PCR擴(kuò)增質(zhì)粒PMD19-T simple-Ipr1中的目的基因Ipr1,將目的基因Ipr1克隆入原核質(zhì)粒pET32a（+）,構(gòu)建原... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ipr1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig1.PCRproductofIpr1geneM：DNAMarkerDL2000

重組質(zhì)粒pET32a(+)-Ipr1雙酶切的鑒定Fig2restrictionmapofrecombinantplasmidpET32a(+)-Ipr1byBamHⅠ/KpnⅠM：DNAMarkerDL2000

圖 3 重組子在大腸桿菌 BL21 中的表達(dá)的 SDS-PAGE 分析Fig. 3 SDS-PAGE of Ipr1expression products in E. coli BL 2 1M. protein marker1-2. BL21 with pET32a(+) uninduced by IPTG3. BL21 uninduced by IPTG4. BL21 with pET32a(+)-Ipr1 uninduced by IPTG蛋白的 Western blot 鑒定組蛋白與 V5 抗體做免疫印跡，可見 70kDa 處有一條明顯條帶（圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分枝桿菌穿梭表達(dá)質(zhì)粒pJHSP70的構(gòu)建及鑒定[J]. 呂琳,曹紅丹,王丕龍,劉少寧,王麗娟,向廷秀.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2008(10)
[2]GLS/IL-12重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建及其在小鼠體內(nèi)的表達(dá)[J]. 楊春,何永林,伊正君,李俊明,李娜,朱道銀.  免疫學(xué)雜志. 2007(01)
[3]多基因共表達(dá)載體的構(gòu)建策略[J]. 曹慧青.  國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊). 2002(01)



本文編號：3558332