目的:布魯氏菌�。ê喎Q布�。┦蔷哂惺澜绶植夹缘囊活惾诵蠊不紓魅静�,全世界每年新增感染人數(shù)大約為50萬人。在全世界報告有人畜疫情的國家有170多個。然而,目前的布魯氏菌疫苗多為弱毒疫苗,存在一定的毒力。隨著研究的不斷深入,至今已知的布魯氏菌蛋白中優(yōu)勢抗原蛋白主要包括外膜蛋白（OMPs）、核蛋白L7/L12、表面蛋白（BCSP）、胞質(zhì)結(jié)合蛋白（P39）等。P39蛋白是其中較好的T細(xì)胞抗原,是公認(rèn)的布魯氏菌優(yōu)勢抗原,但是其免疫保護(hù)不足。研究發(fā)現(xiàn),糖基化可以提高蛋白免疫原性。本實(shí)驗(yàn)以期通過甘露六糖修飾P39蛋白,研究糖修飾對蛋白免疫原性的影響,為布魯氏菌糖修飾蛋白抗原疫苗的研究提供理論基礎(chǔ)。方法:本實(shí)驗(yàn)以布魯氏菌P39蛋白為研究對象,設(shè)計(jì)引物并利用PCR法擴(kuò)增獲得P39基因片段,將目的基因連接至表達(dá)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒后IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,利用GST層析柱對目的蛋白P39進(jìn)行純化。EDC/NHS化學(xué)偶聯(lián)法對該蛋白進(jìn)行甘露六糖修飾,并檢測其糖與蛋白修飾比。然后利用MTT法、間接ELISA法對甘露六糖修飾蛋白免疫小鼠后進(jìn)行細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子檢測、抗體水平檢測等實(shí)驗(yàn)。此外,利用上述方法研究該糖修... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

P39簽因裹達(dá)片段PCR擴(kuò)增的電泳瓏1.1PCRproductsofP39gmeM:標(biāo)準(zhǔn)DNA分子絕;LPCR擴(kuò)增樣品M:DNAMuka;1.PCRprodud

.2 重組克隆載體的驗(yàn)證將 P39 目的基因片段與 pMD-19T 載體連接后，轉(zhuǎn)入 E.coli DH5α 感受態(tài)細(xì)胞。提取質(zhì)質(zhì)粒為模板進(jìn)行 PCR 驗(yàn)證得到陽性克隆菌株，片段大小為 1206 bp(圖 1.2)。提取質(zhì)粒并用 BamH I 和 Xho I 雙酶切，得到了載體與目的基因片段，成功獲取目的基，片段大小為 1206 bp。(圖 1.3)

39簽因農(nóng)達(dá)片段雙蕊切鑒定緒果側(cè)凡13deti5cationofp39reshuetsamgplasmid妙resmetionmdomuelease.M:標(biāo)準(zhǔn)DNA分子圣;1.質(zhì)救2BmnHI單耽切3XhoI單藺切4.雙藺切vM:DN

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗布魯菌感染免疫防御機(jī)制及相關(guān)保護(hù)性抗原研究進(jìn)展[J]. 張佩君,劉慧,李延華,趙玄多,陳德坤.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2014(02)
[2]Toll樣受體在免疫應(yīng)答中的作用[J]. 褚萬立.  醫(yī)學(xué)綜述. 2006(15)

碩士論文
[1]牛布魯氏菌抗原蛋白的克隆表達(dá)及其刺激能力的評價[D]. 杜強(qiáng).揚(yáng)州大學(xué) 2015
[2]羊布魯氏菌病疫苗免疫后抗體消長規(guī)律研究及4種抗體檢測方法的比較[D]. 高越.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3556147