本文關(guān)鍵詞：MAPK信號(hào)通路在低剪切力誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞Fractalkine表達(dá)中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:血流剪切應(yīng)力與血管內(nèi)皮之間的相互作用是決定心血管功能的一個(gè)重要指標(biāo),本研究意在探討p38、JNK細(xì)胞內(nèi)絲裂原活化蛋白激酶〔mitogen-activated protein kinaes,MAPK)家族亞類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在低剪切力誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞FKN基因表達(dá)中的調(diào)控作用。方法:1)用M199生長(zhǎng)液(含1%青鏈霉素合劑和10%的胎牛血清的M199培養(yǎng)基)培養(yǎng)EA.HY926細(xì)胞株。在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),通過(guò)Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化及細(xì)胞的增長(zhǎng)曲線鑒定EA.HY926細(xì)胞株。2)用光學(xué)顯微鏡觀察低剪切力(4.58dyne/cm2)處理60min后,EA.HY926細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)變化。3)用Western blot免疫印跡方法分析低剪切力(4.58dyne/cm2)處理不同時(shí)間對(duì)EA.HY926細(xì)胞株p38MAPK和JNK信號(hào)分子磷酸化水平的影響,并分析相應(yīng)的阻斷劑對(duì)p38和JNK磷酸化水平的抑制程度;觀察p38、JNK通路阻斷劑對(duì)低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的EA.HY926人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株FKN蛋白表達(dá)的影響。4)采用熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞中FKN mRNA的表達(dá),研究p38MAPK和JNK信號(hào)通路阻斷劑對(duì)低剪切應(yīng)力誘導(dǎo)的EA.HY926人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株FKN m RNA表達(dá)的影響。結(jié)果:1)EA.HY926細(xì)胞株形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在生長(zhǎng)2~3d后即可鋪滿單層,呈梭形、漩渦狀排列,傳代后可見(jiàn)管腔樣結(jié)構(gòu),細(xì)胞可長(zhǎng)成復(fù)層;透射電子顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞特有的桿狀細(xì)胞器,即Webel-Palade小體;免疫組化結(jié)果顯示,細(xì)胞質(zhì)表現(xiàn)為棕黃色顆粒;EA.HY926細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線穩(wěn)定,適用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。2)低剪切力(4.58dyne/cm2)處理60min后細(xì)胞形態(tài)變化不規(guī)則,局部區(qū)域可見(jiàn)細(xì)胞間隙增大、細(xì)胞皺縮,少量細(xì)胞有脫落現(xiàn)象。3)低剪切力處理可引起EA.HY926細(xì)胞株p38蛋白磷酸化水平的上調(diào),其表達(dá)與剪切力作用時(shí)間有關(guān),低剪切力作用5min后其表達(dá)量開(kāi)始增加,30min時(shí)表達(dá)量最高,之后表達(dá)量降低。磷酸化的p38可進(jìn)入細(xì)胞核,通過(guò)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控基因表達(dá)。用SB203580阻斷p38信號(hào)通路可顯著抑制低剪切力所致EA.HY926細(xì)胞株FKN基因的上調(diào)。4)低剪切力處理可引起EA.HY926細(xì)胞株JNK蛋白磷酸化水平的上調(diào),其表達(dá)與剪切力作用時(shí)間有關(guān),隨剪切應(yīng)力作用時(shí)間的延長(zhǎng)磷酸化JNK表達(dá)量也增加,60min時(shí)JNK磷酸化程度最高,呈時(shí)間依賴性。磷酸化的JNK移位入核,通過(guò)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控有關(guān)基因表達(dá)。用SP600125阻斷JNK信號(hào)通路可顯著抑制低剪切力所致EA.HY926細(xì)胞株FKN基因的上調(diào)。5)p38和JNK信號(hào)通路阻斷劑抑制低剪切力所致EA.HY926細(xì)胞株FKN蛋白上調(diào)表達(dá)。結(jié)論:剪切力可激活p38和JNK MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,激活的p38和JNK信號(hào)分子參與調(diào)節(jié)低剪切力誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞Fractalkine的表達(dá)上調(diào)過(guò)程。p38 MAPK和JNK信號(hào)通路抑制劑能夠下調(diào)低剪切力誘導(dǎo)Fractalkine的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：絲裂原活化蛋白激酶 低剪切應(yīng)力 FKN EA.HY926細(xì)胞株
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R331

  本文關(guān)鍵詞：MAPK信號(hào)通路在低剪切力誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞Fractalkine表達(dá)中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：354407