本文關(guān)鍵詞：基于量子點(diǎn)的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器檢測結(jié)核感染的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.設(shè)計(jì)并制備多條結(jié)核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B,并從中優(yōu)選出特異性較高的肽段。2.構(gòu)建新型的超靈敏納米免疫電化學(xué)傳感器,探討其用于結(jié)核感染診斷的價(jià)值。方法:1.參考文獻(xiàn)并利用抗原表位分析軟件設(shè)計(jì)多條結(jié)核特異性抗原多肽,收集189例結(jié)核病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),分別用結(jié)核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B刺激PBMC培養(yǎng)72 h,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,用ELISA法檢測上清中分泌的IFN-γ水平,篩選出能刺激PBMC分泌較多IFN-γ的多肽。2.收集151例結(jié)核病患者PBMC,用ELISA法篩選出來的結(jié)核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B單獨(dú)或以不同組合方式刺激PBMC培養(yǎng)22 h,用ELISPOT法檢測斑點(diǎn)形成數(shù),篩選出能刺激PBMC形成較多斑點(diǎn)數(shù)的多肽或多肽庫。3.在磁珠表面覆蓋量子點(diǎn)和二抗,構(gòu)建以磁珠-量子點(diǎn)-二抗復(fù)合物為免疫探針的新型超靈敏納米免疫電化學(xué)傳感器,利用前面實(shí)驗(yàn)篩選出來的抗原肽刺激結(jié)核病患者的PBMC分泌細(xì)胞因子IFN-γ,通過夾心免疫法和電化學(xué)中的方波溶出伏安法檢測IFN-γ水平,判斷結(jié)核感染。結(jié)果:1.設(shè)計(jì)并合成了10條ESAT-6多肽(編號(hào)E1-E10)、10條CFP-10多肽(編號(hào)C1-C10)以及9條Ag85B多肽(編號(hào)A1-A9)。2.通過ELISA法初步篩選出3條ESAT-6多肽(E3、E6、E9)、3條CFP-10多肽(C1、C6、C8)、3條Ag85B多肽(A2、A5、A9),通過ELISPOT法進(jìn)一步篩選出不同多肽的優(yōu)勢(shì)組合。3.成功構(gòu)建基于量子點(diǎn)的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器,該傳感器在IFN-γ濃度從0.01pg/m L到10ng/m L范圍內(nèi),與Cd2+離子溶出峰電流成良好的線性關(guān)系(R2=0.966),在實(shí)際樣品檢測結(jié)果中與ELISA結(jié)果一致,有望用于臨床結(jié)核感染的診斷。結(jié)論:結(jié)核特異性抗原多肽E3、E6、E9、C1、C6、C8、A2、A5、A9具有較好的特異性,其不同的組合方式構(gòu)成的多肽庫在刺激結(jié)核病患者PBMC分泌IFN-γ的特異性進(jìn)一步提高,在IFN-γ釋放試驗(yàn)中有重要應(yīng)用價(jià)值。新型的基于量子點(diǎn)的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器具有靈敏度高,穩(wěn)定性好,響應(yīng)速度快、價(jià)格低廉、操作簡便等諸多優(yōu)勢(shì),并且在樣品實(shí)際檢測中具有可行性,該納米免疫傳感系統(tǒng)有望用于臨床結(jié)核感染的診斷以及其他病原微生物的檢測和疾病的診斷。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核 ESAT-6 CFP-10 Ag85B 量子點(diǎn) 磁珠 方波溶出伏安法
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-22
• 1.1 結(jié)核概述10
• 1.2 活動(dòng)性結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法10-13
• 1.2.1 痰涂片和痰細(xì)菌培養(yǎng)10-11
• 1.2.2 核酸擴(kuò)增試驗(yàn)11
• 1.2.3 血清學(xué)抗體檢測11-12
• 1.2.4 結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)12
• 1.2.5 γ-干擾素釋放試驗(yàn)12-13
• 1.3 結(jié)核特異性抗原ESAT-6、CFP-10、Ag85B13-14
• 1.4 電化學(xué)生物傳感器14-15
• 1.5 量子點(diǎn)15-17
• 1.6 納米磁珠17-19
• 1.7 研究目的和意義19-20
• 1.8 論文創(chuàng)新點(diǎn)20-22
• 第二章 結(jié)核特異性抗原肽的篩選22-41
• 2.1 引言22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料23-25
• 2.2.1 主要儀器23
• 2.2.2 主要試劑23-24
• 2.2.3 溶液配制24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-30
• 2.3.1 設(shè)計(jì)、合成抗原多肽25-26
• 2.3.2 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞26-27
• 2.3.3 ELISA法篩選優(yōu)勢(shì)抗原肽27-28
• 2.3.4 ELISPOT法篩選優(yōu)勢(shì)抗原肽28-30
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-37
• 2.4.1 ELISA法篩選優(yōu)勢(shì)抗原肽30-34
• 2.4.2 ELISPOT法篩選優(yōu)勢(shì)抗原肽34-37
• 2.5 討論37-40
• 2.6 結(jié)論40-41
• 第三章 電化學(xué)傳感系統(tǒng)檢測結(jié)核感染的研究41-58
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料42-44
• 3.2.1 主要儀器42
• 3.2.2 主要試劑42-43
• 3.2.3 溶液配制43-44
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法44-48
• 3.3.1 功能化CdS QDs的制備44
• 3.3.2 磁珠-量子點(diǎn)（MB-QD）復(fù)合物的制備44
• 3.3.3 磁珠-量子點(diǎn)-二抗（MB-QD-Ab2）復(fù)合物的制備44-45
• 3.3.4 樣品處理45
• 3.3.5 酶標(biāo)板上免疫反應(yīng)45-46
• 3.3.6 方波溶出伏安法檢測條件的優(yōu)化46
• 3.3.7 方波溶出伏安法檢測46-47
• 3.3.8 ELISA法檢測樣品47-48
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論48-57
• 3.4.1 磁珠與磁珠-量子點(diǎn)復(fù)合物的熒光顯微鏡成像48-49
• 3.4.2 磁珠與磁珠-量子點(diǎn)復(fù)合物的掃描電子顯微鏡（SEM）成像49-50
• 3.4.3 最佳參數(shù)的優(yōu)化選擇50-55
• 3.4.4 方波溶出伏安法檢測電流響應(yīng)值55-57
• 3.4.5 臨床樣本檢測57
• 3.5 結(jié)論57-58
• 第四章 全文小結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 中英文對(duì)照縮略詞表65-67
• 在學(xué)期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及參與科研項(xiàng)目67-68
• 致謝68

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 薛麗京;劉燕;何橋;譚耀駒;;結(jié)核分枝桿菌多克隆抗體在結(jié)核性病變中的診斷價(jià)值[J];臨床肺科雜志;2014年01期

2 張艷;;腦脊液檢測指標(biāo)在感染性腦膜炎診斷中的應(yīng)用[J];臨床誤診誤治;2015年07期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 鄔強(qiáng);結(jié)核分枝桿菌抗原及其融合蛋白在大腸桿菌、煙草中表達(dá)和免疫效應(yīng)研究[D];海南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：基于量子點(diǎn)的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器檢測結(jié)核感染的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：352327