發(fā)布時間：2017-05-09 10:18

  本文關鍵詞：基于量子點的超靈敏電化學免疫傳感器檢測結核感染的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1.設計并制備多條結核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B,并從中優(yōu)選出特異性較高的肽段。2.構建新型的超靈敏納米免疫電化學傳感器,探討其用于結核感染診斷的價值。方法:1.參考文獻并利用抗原表位分析軟件設計多條結核特異性抗原多肽,收集189例結核病患者外周血單個核細胞(PBMC),分別用結核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B刺激PBMC培養(yǎng)72 h,收集細胞培養(yǎng)上清,用ELISA法檢測上清中分泌的IFN-γ水平,篩選出能刺激PBMC分泌較多IFN-γ的多肽。2.收集151例結核病患者PBMC,用ELISA法篩選出來的結核特異性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B單獨或以不同組合方式刺激PBMC培養(yǎng)22 h,用ELISPOT法檢測斑點形成數,篩選出能刺激PBMC形成較多斑點數的多肽或多肽庫。3.在磁珠表面覆蓋量子點和二抗,構建以磁珠-量子點-二抗復合物為免疫探針的新型超靈敏納米免疫電化學傳感器,利用前面實驗篩選出來的抗原肽刺激結核病患者的PBMC分泌細胞因子IFN-γ,通過夾心免疫法和電化學中的方波溶出伏安法檢測IFN-γ水平,判斷結核感染。結果:1.設計并合成了10條ESAT-6多肽(編號E1-E10)、10條CFP-10多肽(編號C1-C10)以及9條Ag85B多肽(編號A1-A9)。2.通過ELISA法初步篩選出3條ESAT-6多肽(E3、E6、E9)、3條CFP-10多肽(C1、C6、C8)、3條Ag85B多肽(A2、A5、A9),通過ELISPOT法進一步篩選出不同多肽的優(yōu)勢組合。3.成功構建基于量子點的超靈敏電化學免疫傳感器,該傳感器在IFN-γ濃度從0.01pg/m L到10ng/m L范圍內,與Cd2+離子溶出峰電流成良好的線性關系(R2=0.966),在實際樣品檢測結果中與ELISA結果一致,有望用于臨床結核感染的診斷。結論:結核特異性抗原多肽E3、E6、E9、C1、C6、C8、A2、A5、A9具有較好的特異性,其不同的組合方式構成的多肽庫在刺激結核病患者PBMC分泌IFN-γ的特異性進一步提高,在IFN-γ釋放試驗中有重要應用價值。新型的基于量子點的超靈敏電化學免疫傳感器具有靈敏度高,穩(wěn)定性好,響應速度快、價格低廉、操作簡便等諸多優(yōu)勢,并且在樣品實際檢測中具有可行性,該納米免疫傳感系統(tǒng)有望用于臨床結核感染的診斷以及其他病原微生物的檢測和疾病的診斷。
【關鍵詞】：結核 ESAT-6 CFP-10 Ag85B 量子點 磁珠 方波溶出伏安法
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-22
• 1.1 結核概述10
• 1.2 活動性結核病實驗室診斷方法10-13
• 1.2.1 痰涂片和痰細菌培養(yǎng)10-11
• 1.2.2 核酸擴增試驗11
• 1.2.3 血清學抗體檢測11-12
• 1.2.4 結核菌素皮膚試驗12
• 1.2.5 γ-干擾素釋放試驗12-13
• 1.3 結核特異性抗原ESAT-6、CFP-10、Ag85B13-14
• 1.4 電化學生物傳感器14-15
• 1.5 量子點15-17
• 1.6 納米磁珠17-19
• 1.7 研究目的和意義19-20
• 1.8 論文創(chuàng)新點20-22
• 第二章 結核特異性抗原肽的篩選22-41
• 2.1 引言22-23
• 2.2 實驗材料23-25
• 2.2.1 主要儀器23
• 2.2.2 主要試劑23-24
• 2.2.3 溶液配制24-25
• 2.3 實驗方法25-30
• 2.3.1 設計、合成抗原多肽25-26
• 2.3.2 分離外周血單個核細胞26-27
• 2.3.3 ELISA法篩選優(yōu)勢抗原肽27-28
• 2.3.4 ELISPOT法篩選優(yōu)勢抗原肽28-30
• 2.4 實驗結果30-37
• 2.4.1 ELISA法篩選優(yōu)勢抗原肽30-34
• 2.4.2 ELISPOT法篩選優(yōu)勢抗原肽34-37
• 2.5 討論37-40
• 2.6 結論40-41
• 第三章 電化學傳感系統(tǒng)檢測結核感染的研究41-58
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實驗材料42-44
• 3.2.1 主要儀器42
• 3.2.2 主要試劑42-43
• 3.2.3 溶液配制43-44
• 3.3 實驗方法44-48
• 3.3.1 功能化CdS QDs的制備44
• 3.3.2 磁珠-量子點（MB-QD）復合物的制備44
• 3.3.3 磁珠-量子點-二抗（MB-QD-Ab2）復合物的制備44-45
• 3.3.4 樣品處理45
• 3.3.5 酶標板上免疫反應45-46
• 3.3.6 方波溶出伏安法檢測條件的優(yōu)化46
• 3.3.7 方波溶出伏安法檢測46-47
• 3.3.8 ELISA法檢測樣品47-48
• 3.4 實驗結果與討論48-57
• 3.4.1 磁珠與磁珠-量子點復合物的熒光顯微鏡成像48-49
• 3.4.2 磁珠與磁珠-量子點復合物的掃描電子顯微鏡（SEM）成像49-50
• 3.4.3 最佳參數的優(yōu)化選擇50-55
• 3.4.4 方波溶出伏安法檢測電流響應值55-57
• 3.4.5 臨床樣本檢測57
• 3.5 結論57-58
• 第四章 全文小結58-59
• 參考文獻59-65
• 中英文對照縮略詞表65-67
• 在學期間發(fā)表學術論文及參與科研項目67-68
• 致謝68

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 薛麗京;劉燕;何橋;譚耀駒;;結核分枝桿菌多克隆抗體在結核性病變中的診斷價值[J];臨床肺科雜志;2014年01期

2 張艷;;腦脊液檢測指標在感染性腦膜炎診斷中的應用[J];臨床誤診誤治;2015年07期

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 鄔強;結核分枝桿菌抗原及其融合蛋白在大腸桿菌、煙草中表達和免疫效應研究[D];海南大學;2013年

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本文編號：352327