去泛素化酶（deubiquitinase, DUB）圓柱瘤蛋白（cylindromatosis,CYLD）是腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor,TNFR）介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞死亡的重要調(diào)節(jié)因子,然而CYLD特異性識(shí)別底物的機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)生物識(shí)別（BioID）篩選得到CYLD的相互作用蛋白——精子發(fā)生相關(guān)蛋白2（spermatogenesis associated 2,SPATA2）,并利用免疫沉淀法（immunoprecipitation, IP）和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)（bimolecular fluorescence complementation,BiFC）證實(shí)了CYLD與SPATA2的相互作用。SPATA2敲降或敲除抑制了TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和程序性死亡,增強(qiáng)了炎癥相關(guān)基因的表達(dá)。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),響應(yīng)TNF-α刺激,SPATA2促進(jìn)CYLD向腫瘤壞死因子受體信號(hào)復(fù)合物（tumor necrosis factor receptor signaling complex,TNFRSC）招募和催化受體相互作用蛋白1（receptor-... 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代免疫學(xué). 2019,39(06)北大核心CSCD

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SPATA2-CYLD相互作用的鑒定與驗(yàn)證

CYLD的一個(gè)重要功能是在TNFR介導(dǎo)的信號(hào)通路中去泛素化RIP1,進(jìn)而抑制NF-κB激活,促進(jìn)細(xì)胞死亡。為了闡明SPATA2是否在這一過(guò)程中發(fā)揮作用,本研究分析了SPATA2敲降對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。用TNF-α和蛋白合成抑制劑CHX處理對(duì)照組和SPATA2敲降組的HeLa細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,然后用Annexin V和PI染色,用FCM分析細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示,TNF-α和CHX聯(lián)合處理導(dǎo)致明顯的細(xì)胞凋亡;與對(duì)照組細(xì)胞相比,SPATA2敲降組細(xì)胞凋亡顯著減少,說(shuō)明SPATA2有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。(圖2)2.3 SPATA2促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞壞死

以上研究結(jié)果顯示,SPATA2在調(diào)控TNF通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞死亡方面具有與CYLD相一致的功能,推測(cè)SPATA2作為CYLD的相互作用蛋白可能在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮調(diào)控CYLD的作用。為了驗(yàn)證這一推測(cè),采用IP檢測(cè)了TNF下游信號(hào)復(fù)合物TNFRSC的聚集和RIP1泛素化修飾。結(jié)果顯示,在對(duì)照組細(xì)胞中TNF-α誘導(dǎo)CYLD 向TNFRSC的招募,而在SPATA2敲降組細(xì)胞中, CYLD的招募大幅減少(圖5A),說(shuō)明SPATA2促進(jìn)CYLD的招募。與CYLD招募水平相一致,SPATA2敲降明顯增加了RIP1的泛素化水平,達(dá)到了與CYLD敲降類(lèi)似的效果(圖5B)。這些結(jié)果表明,SPATA2促進(jìn)CYLD招募到TNFRSC進(jìn)行RIP1的泛素化,同時(shí)很好地解釋了SPATA2如何響應(yīng)TNF-α刺激促進(jìn)細(xì)胞死亡、抑制炎癥反應(yīng)。圖4 野生型和SPATA2敲除的BMDM誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)變化情況

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 崔暢婉,孫崢嶸.  現(xiàn)代免疫學(xué). 2019(01)



本文編號(hào)：3483159