去泛素化酶（deubiquitinase, DUB）圓柱瘤蛋白（cylindromatosis,CYLD）是腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor,TNFR）介導的炎癥反應和細胞死亡的重要調節(jié)因子,然而CYLD特異性識別底物的機制尚不清楚。本研究通過生物識別（BioID）篩選得到CYLD的相互作用蛋白——精子發(fā)生相關蛋白2（spermatogenesis associated 2,SPATA2）,并利用免疫沉淀法（immunoprecipitation, IP）和雙分子熒光互補技術（bimolecular fluorescence complementation,BiFC）證實了CYLD與SPATA2的相互作用。SPATA2敲降或敲除抑制了TNF-α誘導的細胞凋亡和程序性死亡,增強了炎癥相關基因的表達。機制研究發(fā)現(xiàn),響應TNF-α刺激,SPATA2促進CYLD向腫瘤壞死因子受體信號復合物（tumor necrosis factor receptor signaling complex,TNFRSC）招募和催化受體相互作用蛋白1（receptor-... 

【文章來源】：現(xiàn)代免疫學. 2019,39(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

SPATA2-CYLD相互作用的鑒定與驗證

CYLD的一個重要功能是在TNFR介導的信號通路中去泛素化RIP1,進而抑制NF-κB激活,促進細胞死亡。為了闡明SPATA2是否在這一過程中發(fā)揮作用,本研究分析了SPATA2敲降對TNF-α誘導的細胞凋亡的影響。用TNF-α和蛋白合成抑制劑CHX處理對照組和SPATA2敲降組的HeLa細胞,誘導細胞凋亡,然后用Annexin V和PI染色,用FCM分析細胞凋亡情況。結果顯示,TNF-α和CHX聯(lián)合處理導致明顯的細胞凋亡;與對照組細胞相比,SPATA2敲降組細胞凋亡顯著減少,說明SPATA2有促進細胞凋亡的作用。(圖2)2.3 SPATA2促進TNF-α誘導的細胞壞死

以上研究結果顯示,SPATA2在調控TNF通路介導的炎癥反應和細胞死亡方面具有與CYLD相一致的功能,推測SPATA2作為CYLD的相互作用蛋白可能在這個過程中發(fā)揮調控CYLD的作用。為了驗證這一推測,采用IP檢測了TNF下游信號復合物TNFRSC的聚集和RIP1泛素化修飾。結果顯示,在對照組細胞中TNF-α誘導CYLD 向TNFRSC的招募,而在SPATA2敲降組細胞中, CYLD的招募大幅減少(圖5A),說明SPATA2促進CYLD的招募。與CYLD招募水平相一致,SPATA2敲降明顯增加了RIP1的泛素化水平,達到了與CYLD敲降類似的效果(圖5B)。這些結果表明,SPATA2促進CYLD招募到TNFRSC進行RIP1的泛素化,同時很好地解釋了SPATA2如何響應TNF-α刺激促進細胞死亡、抑制炎癥反應。圖4 野生型和SPATA2敲除的BMDM誘導的細胞因子表達變化情況

【參考文獻】：
期刊論文
[1]潰瘍性結腸炎發(fā)病機制研究進展[J]. 崔暢婉,孫崢嶸.  現(xiàn)代免疫學. 2019(01)



本文編號：3483159