乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬（Flavivirus）,其基因組為11kb左右的單股正鏈RNA。乙型腦炎的治療沒有特殊的有效方法,因此,在分子水平上闡明JEV的致病機制,進而開發(fā)特殊有效的乙型腦炎治療藥物,是近年來國內(nèi)外乙JEV研究的熱點和前沿。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細胞中一種重要的亞細胞器。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)蛋白質(zhì)未完全折疊或折疊錯誤等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力能引起從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到胞漿和胞核的信號傳導(dǎo)途徑即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力、利于細胞生存的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)包含非折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)（unfolded protein response,UPR）。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的非折疊或錯誤折疊蛋白積累時,分子伴侶GRP78（glucose-regulated protein 78,也稱Bi P）與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的三種跨膜蛋白ATF6（activating transcription factor 6）、IRE1（inositol-requiringenzyme 1）和PERK（PER-like ER kinase）解離,進而激活UPR的三條信號通路（ATF6,IRE1和PERK信號... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstrct
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 日本腦炎病毒
        1.1.1 世界乙型腦炎流行情況
        1.1.2 我國乙型腦炎流行情況
        1.1.3 JEV傳播途徑
        1.1.4 JEV的感染與發(fā)病
        1.1.5 JEV基因組
        1.1.6 JEV分型
        1.1.7 JEV的生命周期
    1.2 哺乳動物非折疊蛋白反應(yīng)研究進展
        1.2.1 折疊循環(huán)、質(zhì)量控制、ER相關(guān)的降解（ERAD）
        1.2.2 PERK通路
        1.2.3 ATF6途徑
        1.2.4 IRE1通路
    1.3 ER導(dǎo)致的自噬和凋亡
第二章 JEV誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)及細胞凋亡
    2.1 前言
    2.2 試驗材料
        2.2.1 細胞系材料
        2.2.2 病毒株材料
        2.2.3 試劑
    2.3 試驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)和病毒擴增、滴度測定
        2.3.2 病毒、藥物處理細胞試驗
        2.3.3 RT-PCR
        2.3.4 Western blot
        2.3.5 細胞增殖與細胞毒檢測（MTT法）
    2.4 試驗結(jié)果
        2.4.1 乙腦病毒感染誘導(dǎo)GRP78，ATF4轉(zhuǎn)錄水平升高。
        2.4.2 乙腦病毒感染誘導(dǎo)XBP1 mRNA拼接
        2.4.3 乙腦病毒感染誘導(dǎo)GRP78， chop蛋白水平升高和ATF6剪切
        2.4.4 乙腦病毒感染和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)激活誘導(dǎo)BHK-21細胞病變和活力降低
    2.5 討論
第三章 RNA-seq技術(shù)研究JEV引起的細胞內(nèi)基因表達水平變化
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞系材料
        3.2.2 病毒株材料
        3.2.3 試劑：
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)等
        3.3.2 病毒、藥物處理細胞試驗
        3.3.3 RNA提取
        3.3.4 送樣測序
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 RNA樣品質(zhì)量滿足建庫測序要求
        3.4.2 得到可靠測序數(shù)據(jù)
        3.4.3 比對參考基因組
        3.4.4 各組基因表達水平差異
        3.4.5 差異基因表達分析
    3.5 討論
第四章 JEV通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)IRE1/JNK信號通路誘導(dǎo)細胞凋亡
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞系材料
        4.2.2 病毒株材料
        4.2.3 試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞培養(yǎng)
        4.3.2 細胞的處理
        4.3.3 細胞增殖與細胞毒檢測（MTT法）
        4.3.4 細胞流式實驗
        4.3.5 western blot實驗
        4.3.6 磷酸化western blot實驗
        4.3.7 RT-PCR
        4.3.8 TCID50
        4.3.9 統(tǒng)計分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 IRE1抑制劑、JNK激酶抑制劑處理接毒后的細胞能顯著減少細胞凋亡的發(fā)生
        4.4.2 IRE1抑制劑處理使接毒細胞內(nèi)CHOP、caspsase 3 和磷酸化IRE1蛋白水平下降
        4.4.3 藥物處理對JEV復(fù)制沒有影響
    4.5 討論
在校期間完成的其他工作
參考文獻
致謝
在校期間論文發(fā)表情況



本文編號：3482561