發(fā)布時間：2021-11-03 12:06

　　研究背景:近年來,嵌合抗原受體T細(xì)胞（Chimeric Antigen Receptor T-cell Immunotherapy,CAR-T）免疫療法在惡性血液腫瘤生物治療領(lǐng)域取得了前所未有的成功。CAR-T免疫療法的原理在于CAR修飾的T細(xì)胞可以特異性地識別血液腫瘤相關(guān)抗原,CAR-T細(xì)胞的靶向性、殺傷活性和持久性均高于常規(guī)應(yīng)用的免疫細(xì)胞。然而,CAR-T細(xì)胞免疫療法對于實體腫瘤作用不佳,其主要原因包括:（1）CAR-T細(xì)胞進(jìn)入實體腫瘤能力有限;（2）一旦進(jìn)入也常由于腫瘤組織內(nèi)免疫抑制微環(huán)境而不能有效發(fā)揮功能;（3）進(jìn)入腫瘤中的CAR-T細(xì)胞會發(fā)生“耗竭”等T細(xì)胞固有的負(fù)性調(diào)節(jié)現(xiàn)象。因此,我們需要尋找新的效應(yīng)細(xì)胞,能夠更容易進(jìn)入腫瘤組織局部,并且能夠通過直接殺傷腫瘤細(xì)胞或者協(xié)同T細(xì)胞等多種方式發(fā)揮抗腫瘤作用。我們課題組的前期工作構(gòu)建了表達(dá)抗人CD19-CAR的新型效應(yīng)細(xì)胞,在由白血病患者腫瘤細(xì)胞構(gòu)建的小鼠異種白血病模型中回輸后,小鼠外周血中腫瘤細(xì)胞負(fù)荷顯著降低、小鼠生存時間延長、生存率提高。但由于在小鼠異種白血病模型中,為保證人腫瘤細(xì)胞的生存及成瘤,應(yīng)用的是T細(xì)胞、B細(xì)胞及NK細(xì)胞... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

流式檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后獲得的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞表面人CD19分子的表

物活體成像儀及酶標(biāo)儀能夠檢測到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)的 的發(fā)光信號素底物作用后，用小動物活體成像儀檢測可見轉(zhuǎn)染細(xì)胞有9和luciferase的EG7細(xì)胞其信號強(qiáng)度雖然較表達(dá)GC261，但是仍可見明顯發(fā)光信號。而加入 PBS 溶液的對照組M 培養(yǎng)基組均未見發(fā)光信號（圖 3.2）。酶標(biāo)儀檢測可見GC261 和 luciferase 的 B4 細(xì)胞和表達(dá)人 CD19 和 lucifera信號。在加入底物 13min 后，表達(dá) GC261 和 luciferase 的最大，隨著時間的推移，發(fā)光強(qiáng)度顯著下降。表達(dá)人 CD19在與底物作用13min后發(fā)光強(qiáng)度達(dá)到最高，與表達(dá)GC261同，在隨后觀察的 15min 里，發(fā)光強(qiáng)度穩(wěn)定形成平臺期-WT 與 DMEM 培養(yǎng)基組均未檢測到發(fā)光信號（圖 3.3）。

圖 3.3 酶標(biāo)儀檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)的 luciferase 與底物作用后的發(fā)光情況ure.3.3 Detection of the luminescence of transfected EG7 cell by microplate 不同數(shù)量的穩(wěn)定表達(dá)人 CD19 分子以及 luciferase 的 EG7 下接種給 C57BL/6 小鼠后腫瘤形成情況.1 不同數(shù)量穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞皮下接種后小鼠的成瘤率將不同數(shù)量的表達(dá)人 CD19 分子和 luciferase 的 EG7 細(xì)胞皮下接7BL/6 小鼠構(gòu)建淋巴瘤模型實驗中，接種后第 5 天 1×106組有 2 只小鼠可股溝皮下觸及硬性結(jié)節(jié)，撥開腹部毛發(fā)肉眼見細(xì)小突起；而 1×105組 25×105組5只小鼠在接種后第7天于接種部位觸摸到腫瘤結(jié)節(jié)存在（圖3

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淋巴瘤診斷與治療的十年回顧[J]. 韓穎,石遠(yuǎn)凱.  實用腫瘤雜志. 2017(06)
[2]淋巴瘤實驗動物模型構(gòu)建的研究與應(yīng)用[J]. 熊豫麟,張遠(yuǎn)旭,黃云超,楊世華.  廣東醫(yī)學(xué). 2014(09)



本文編號：3473653