目的:目前已報(bào)道了線粒體自噬等與細(xì)胞器相關(guān)的多種選擇性自噬,推測可能存在降解和清除細(xì)胞器高爾基體的高爾基體自噬。本課題擬證明一種新型選擇性自噬-高爾基體自噬的存在,發(fā)現(xiàn)高爾基體外膜蛋白GOLPH3能夠作為自噬受體蛋白調(diào)控高爾基體自噬的發(fā)生,且高爾基體自噬介導(dǎo)了apelin-13/APJ促心肌細(xì)胞肥大的過程。方法:1.采用熒光顯微鏡觀察高爾基體順式膜囊標(biāo)志蛋白GM130-RFP與自噬標(biāo)志蛋白LC3B-GFP的熒光共定位情況;2.采用熒光顯微鏡觀察高爾基體反式膜囊標(biāo)志蛋白TGN46-RFP與自噬標(biāo)志蛋白LC3B-GFP的熒光共定位情況;3.采用透射電鏡觀察高爾基體自噬的發(fā)生;4.采用免疫共沉淀技術(shù)觀察GOLPH3與LC3B的蛋白相互作用。5.采用siRNA干擾GOLPH3來觀察高爾基體自噬的情況;6.過表達(dá)APJ受體觀察高爾基體自噬的發(fā)生;7.免疫組化觀察尸檢心肌肥厚病人體內(nèi)GOLPH3的表達(dá)情況;8.細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測心肌細(xì)胞直徑及體積。結(jié)果:1.饑餓誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞（H9c2）、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）、人主動脈平滑肌細(xì)胞（HA-VSMCs）以及人胚胎腎細(xì)胞（HEK293T）內(nèi)的高... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略語索引
第1章 緒論
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 主要質(zhì)粒、抗體、試劑
    2.3 主要儀器
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 熒光共定位
    3.3 免疫共沉淀
    3.4 免疫印跡
    3.5 RNA干擾技術(shù)
    3.6 透射電鏡
    3.7 質(zhì)譜分析法
    3.8 免疫組織化學(xué)法
    3.9 H9c2心肌細(xì)胞肥大的檢測
    3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 饑餓、缺氧、雷帕霉素引起高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.1 饑餓誘導(dǎo)高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.2 缺氧誘導(dǎo)高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.3 雷帕霉素誘導(dǎo)高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.2 高爾基體應(yīng)激誘導(dǎo)劑引起高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.3 Apelin-13、過表達(dá)APJ、AngII、壓應(yīng)力均能誘導(dǎo)高爾基體標(biāo)志蛋白和自噬標(biāo)志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.4 透射電鏡結(jié)果顯示饑餓誘導(dǎo)高爾基體自噬
    4.5 透射電鏡結(jié)果顯示apelin-13、AngII及壓應(yīng)力誘導(dǎo)高爾基體自噬
    4.6 饑餓、缺氧、雷帕霉素誘導(dǎo)GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.7 高爾基體應(yīng)激誘導(dǎo)劑引起GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.8 Apelin-13、過表達(dá)APJ、AngII以及壓應(yīng)力誘導(dǎo)GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.9 干擾GOLPH3的表達(dá)能夠抑制高爾基體自噬
    4.10 高爾基體自噬介導(dǎo)了Apelin-13/APJ促心肌細(xì)胞肥大
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)翻譯
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號：3464380