寨卡病毒（Zika Virus,ZIKV）屬黃病毒科黃病毒屬,單股正鏈RNA病毒,直徑約50 nm,基因組大小約為10.7Kb。寨卡病毒病是由寨卡病毒引起的一種蚊媒病毒病,主要通過伊蚊進行傳播。2015年以后,拉丁美洲寨卡病毒病暴發(fā),同時伴隨大量新生兒出現(xiàn)小頭癥。2016年2月1日,世界衛(wèi)生組織（WHO）將其列為值得全球關注的公共衛(wèi)生危機。目前,國內(nèi)外尚無有效的疫苗和藥物可以預防和治療寨卡病毒病,所以迫切需要研發(fā)寨卡病毒疫苗。減毒活疫苗是目前使用的疫苗類型之一,它可以全面激活體液和細胞免疫應答反應,使機體獲得更廣泛持久的免疫保護。近年來,microRNA（miRNA）介導的靶向減毒策略在病毒疫苗研究領域中取得了突破性進展,其主要機制是利用組織細胞內(nèi)特異的miRNA能夠控制病毒組織嗜性,借此降低或消除病毒在特定組織的增殖和致病效應。這一策略能保留病毒免疫原性,又可降低病毒致病性,為研制新型減毒活疫苗提供了全新的手段。現(xiàn)已確認,寨卡病毒感染能夠?qū)е屡咛ツX中神經(jīng)干細胞的增殖與分化異常,造成神經(jīng)元大量死亡,引起小頭癥。因此,如果能夠抑制寨卡病毒在胚胎腦組織中的復制,則有可能大大降低寨卡病毒感染... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
第一部分 寨卡病毒micro RNA靶向減毒疫苗株的構建與鑒定
    1 引言
    2 材料
        2.1 病毒毒株、菌株、細胞系、質(zhì)粒以及實驗動物
        2.2 實驗試劑和儀器
    3 方法
        3.1 ZIKV重組病毒全長感染性克隆構建策略
        3.2 構建方法
        3.3 恢復病毒的傳代和擴大培養(yǎng)
        3.4 恢復病毒基因組的RT-PCR鑒定
        3.5 恢復病毒的噬斑形成實驗
        3.6 恢復病毒的間接免疫熒光熒光實驗
        3.7 重組病毒基因組二級結構預測
        3.8 重組病毒穩(wěn)定性研究
        3.9 重組病毒在乳鼠顱內(nèi)神經(jīng)毒力評價
    4 結果
        4.1 PCR擴增各分片段
        4.2 融合PCR方法擴增各目的片段
        4.3 雙酶切質(zhì)粒及融合片段
        4.4 重組克隆質(zhì)粒線性化及酚氯仿抽提產(chǎn)物鑒定結果
        4.5 體外轉(zhuǎn)錄重組病毒克隆質(zhì)粒的產(chǎn)物鑒定
        4.6 寨卡重組病毒基因組的RT-PCR鑒定
        4.7 寨卡重組病毒的空斑形態(tài)
        4.8 寨卡重組病毒的間接免疫熒光分析
        4.9 寨卡重組病毒基因組二級結構預測
        4.10 寨卡重組病毒體外穩(wěn)定性研究
        4.11 寨卡重組病毒與親本株的神經(jīng)毒力評價
    5 討論
第二部分 寨卡病毒micro RNA靶向減毒疫苗株的免疫原性與保護評價
    1 引言
    2 材料
        2.1 毒株和實驗動物
        2.2 試劑與儀器
    3 方法
        3.1 重組病毒在不同細胞系中的生長特征鑒定
        3.2 轉(zhuǎn)染mi RNA mimics后對重組病毒的影響
        3.3 動物免疫
        3.4 重組病毒在乳鼠顱內(nèi)的復制情況
        3.5 重組病毒在小鼠臟器的分布情況
        3.6 重組病毒免疫中和抗體表達測定
        3.7 重組病毒免疫孕保護效果評價
    4 結果
        4.1 重組病毒和親本株在不同細胞系中的生長特征測定
        4.2 轉(zhuǎn)染mi RNA mimics后對重組病毒復制的影響
        4.3 重組病毒在BALB/c乳鼠顱內(nèi)的復制情況評價
        4.4 重組病毒在A129成鼠臟器的分布情況
        4.5 重組病毒免疫BALB/c成鼠中和抗體表達情況
        4.6 重組病毒成鼠體內(nèi)免疫保護效果評價
        4.7 重組病毒免疫孕鼠的保護效果評價
    5 討論
總結
參考文獻
附錄A 個人簡歷
附錄B 主要試劑、溶液配制
附錄C 碩士期間參與撰寫的論著
致謝
綜述 MicroRNA靶向性調(diào)控策略在減毒活疫苗中的研究進展
    參考文獻



本文編號：3439908