目的建立無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細胞的方法,分析其傳代、線性放大過程中的穩(wěn)定性及增殖流感病毒的敏感性。方法運用逐步降血清懸浮馴化法將貼壁培養(yǎng)型MDCK細胞馴化為無血清全懸浮培養(yǎng)型MDCK細胞;進一步分析其生長動力學特性、連續(xù)傳代穩(wěn)定性,在5L生物反應器中擴大培養(yǎng);接種流感和禽流感病毒,測定不同時間HA效價、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。結果成功將ATCC引進的貼壁培養(yǎng)型MDCK細胞馴化為無血清全懸浮培養(yǎng)型MDCK細胞（命名為MDCK-XF02細胞）并凍存;不同接種密度培養(yǎng)MDCK-XF02細胞最大增殖密度均達13.0×10⁶ cells/mL以上,且差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;連續(xù)傳代培養(yǎng)過程中細胞形態(tài)和生長狀況穩(wěn)定,比生長速率差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;三個代次的MDCK-XF02細胞以2.0×10⁶ cells/mL接種于5 L生物反應器,細胞生長狀態(tài)良好,倍增時間小于21 h,在批培養(yǎng)中細胞濃度高達（14.57±0.47）×10⁶ cells/mL,比生長速率分別為... 

【文章來源】：中國人獸共患病學報. 2019,35(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

馴化前后MDCK細胞形態(tài)對比(A:10%FBS,B:1%FBS,C:MDCK-XF02)

血清濃度降到1%適應傳代培養(yǎng)兩代后(P82、P83代),從P84代傳代培養(yǎng)至P98代,共計連續(xù)無血清懸浮馴化培養(yǎng)15代。至P96代傳代時開始擴大細胞培養(yǎng)量,至P98時細胞總數(shù)達2.0×108個以上,消化離心后全用無血清培養(yǎng)基調整細胞密度為3.0×106 cells/mL。至P99代時細胞適應無血清培養(yǎng),在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)活力高、結團少、均一性好,經6次換液后基本適應了懸浮條件下培養(yǎng),細胞生長速度變快,第9次換液后培養(yǎng)24 h,細胞密度達6.3×106 cells/mL。懸浮培養(yǎng)的MDCK細胞(P99代)第一次傳代后以2.0×106 cells/mL接種培養(yǎng)生長速度逐步加快,如圖2所示。2.3 MDCK-XF02細胞的凍存、復蘇和活力檢測結果

倍增時間如圖4所示,分別為(18.96±0.35)h、(20.04±0.56)h、(20.25±1.30)h、(22.29±0.30)h、(21.40±0.83)h。不同密度接種培養(yǎng)MDCK-XF02細胞的倍增時間隨著接種密度的增大逐漸增加,接種密度高低會直接影響細胞的生長周期,接種密度過高導致細胞快速達到最大增值密度,大量細胞代謝副產物極劇增加,迅速進入衰亡期。接種密度過低會導致培養(yǎng)時間增加,大大增加了生產成本和污染風險。選擇合適倍增時間不僅有利于細胞最佳的生長狀態(tài)也有利于生產實際結合,降低生產成本。圖4 不同接種密度培養(yǎng)MDCK-XF02細胞最大增殖密度和倍增時間

【參考文獻】：
碩士論文
[1]Marc-145懸浮培養(yǎng)細胞系的建立及培養(yǎng)研究[D]. 馬花.西北民族大學 2017



本文編號：3436440