目的建立無(wú)血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的方法,分析其傳代、線性放大過(guò)程中的穩(wěn)定性及增殖流感病毒的敏感性。方法運(yùn)用逐步降血清懸浮馴化法將貼壁培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞馴化為無(wú)血清全懸浮培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞;進(jìn)一步分析其生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特性、連續(xù)傳代穩(wěn)定性,在5L生物反應(yīng)器中擴(kuò)大培養(yǎng);接種流感和禽流感病毒,測(cè)定不同時(shí)間HA效價(jià)、CCID₅₀滴度,分析其病毒敏感性。結(jié)果成功將ATCC引進(jìn)的貼壁培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞馴化為無(wú)血清全懸浮培養(yǎng)型MDCK細(xì)胞（命名為MDCK-XF02細(xì)胞）并凍存;不同接種密度培養(yǎng)MDCK-XF02細(xì)胞最大增殖密度均達(dá)13.0×10⁶ cells/mL以上,且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;連續(xù)傳代培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定,比生長(zhǎng)速率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;三個(gè)代次的MDCK-XF02細(xì)胞以2.0×10⁶ cells/mL接種于5 L生物反應(yīng)器,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,倍增時(shí)間小于21 h,在批培養(yǎng)中細(xì)胞濃度高達(dá)（14.57±0.47）×10⁶ cells/mL,比生長(zhǎng)速率分別為... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2019,35(11)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

馴化前后MDCK細(xì)胞形態(tài)對(duì)比(A:10%FBS,B:1%FBS,C:MDCK-XF02)

血清濃度降到1%適應(yīng)傳代培養(yǎng)兩代后(P82、P83代),從P84代傳代培養(yǎng)至P98代,共計(jì)連續(xù)無(wú)血清懸浮馴化培養(yǎng)15代。至P96代傳代時(shí)開(kāi)始擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)量,至P98時(shí)細(xì)胞總數(shù)達(dá)2.0×108個(gè)以上,消化離心后全用無(wú)血清培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為3.0×106 cells/mL。至P99代時(shí)細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng),在無(wú)血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)活力高、結(jié)團(tuán)少、均一性好,經(jīng)6次換液后基本適應(yīng)了懸浮條件下培養(yǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)速度變快,第9次換液后培養(yǎng)24 h,細(xì)胞密度達(dá)6.3×106 cells/mL。懸浮培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞(P99代)第一次傳代后以2.0×106 cells/mL接種培養(yǎng)生長(zhǎng)速度逐步加快,如圖2所示。2.3 MDCK-XF02細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇和活力檢測(cè)結(jié)果

倍增時(shí)間如圖4所示,分別為(18.96±0.35)h、(20.04±0.56)h、(20.25±1.30)h、(22.29±0.30)h、(21.40±0.83)h。不同密度接種培養(yǎng)MDCK-XF02細(xì)胞的倍增時(shí)間隨著接種密度的增大逐漸增加,接種密度高低會(huì)直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)周期,接種密度過(guò)高導(dǎo)致細(xì)胞快速達(dá)到最大增值密度,大量細(xì)胞代謝副產(chǎn)物極劇增加,迅速進(jìn)入衰亡期。接種密度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)時(shí)間增加,大大增加了生產(chǎn)成本和污染風(fēng)險(xiǎn)。選擇合適倍增時(shí)間不僅有利于細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)也有利于生產(chǎn)實(shí)際結(jié)合,降低生產(chǎn)成本。圖4 不同接種密度培養(yǎng)MDCK-XF02細(xì)胞最大增殖密度和倍增時(shí)間

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]Marc-145懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系的建立及培養(yǎng)研究[D]. 馬花.西北民族大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3436440