研究背景鼠疫是一種自然疫源性疾病,其病原菌是鼠疫耶爾森氏菌（以下簡(jiǎn)稱(chēng)鼠疫菌）鼠疫菌共含有3個(gè)質(zhì)粒,即pCD1、pMT1和pPCP1,pCD1質(zhì)粒為鼠疫菌和假結(jié)核耶爾森氏菌所共有,pMT1與pPCP1質(zhì)粒則是鼠疫菌在進(jìn)化過(guò)程中外源性獲得的,為鼠疫菌所特有,與鼠疫菌的致病性密切相關(guān)。細(xì)菌中除了蛋白類(lèi)的調(diào)控因子之外,還存在許多發(fā)揮調(diào)控作用的非編碼RNA（non-coding RNA）,在細(xì)菌中也稱(chēng)作小RNA（small RNA,小 RNA）。小RNA作為調(diào)節(jié)子,可參與細(xì)菌內(nèi)鐵代謝、糖代謝、群體感應(yīng)、外膜蛋白合成、毒力等生理功能的調(diào)控,對(duì)原核生物生理和毒力發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)在不同條件下生長(zhǎng)的鼠疫菌提取它的總RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,新發(fā)現(xiàn)了104個(gè)小RNA,其中包括pMT1與pPCP1質(zhì)粒上的多個(gè)小RNA,而這兩個(gè)質(zhì)粒又是鼠疫菌在進(jìn)化過(guò)程中獲得的,因此驗(yàn)證pMT1與pPCP1質(zhì)粒上小RNA的功能是鼠疫菌致病機(jī)制研究的重要組成部分。本研究旨在利用Northern blot驗(yàn)證新發(fā)現(xiàn)的小RNA,并構(gòu)建小RNA的基因缺失株,通過(guò)一系列的表型篩選實(shí)驗(yàn),初步探究了小RNA對(duì)鼠疫... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
本文研究中所用縮略詞
前言
    1. 鼠疫菌的危害
    2. 鼠疫菌的生化特征和致病機(jī)理
    3. 鼠疫菌和假結(jié)核菌的比較
    4. 細(xì)菌小RNA的研究
        4.1 細(xì)菌小RNA的概念和特征
        4.2 細(xì)菌小RNA的分類(lèi)
        4.3 小RNA與其伴侶分子Hfq
        4.4 細(xì)菌小RNA的功能
    5. 鼠疫菌小RNA的研究
    6. 研究目的與意義
    7. 技術(shù)路線(xiàn)
第一章 小RNA的鑒定
    1. 引言
    2. 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 菌株
        2.2 實(shí)驗(yàn)所用試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4 溶液配制
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 鼠疫菌的培養(yǎng)
        3.2 總RNA的提取
        3.3 體外轉(zhuǎn)錄制備小RNA探針
        3.4 Northern Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
    4. 結(jié)果與分析
        4.1 PCR擴(kuò)增線(xiàn)性DNA模板
        4.2 地高辛標(biāo)記的RNA探針的制備
        4.3 總RNA質(zhì)量檢測(cè)
        4.4 Northern Blot驗(yàn)證小RNA
        4.5 討論
第二章 鼠疫菌小RNA突變株的構(gòu)建
    1. 引言
    2. 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 菌株和質(zhì)粒
        2.2 主要試劑
        2.3 主要儀器與試劑配制
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 小RNA突變株的構(gòu)建
        3.2 小RNA過(guò)表達(dá)株的構(gòu)建
    4. 結(jié)果與分析
        4.1 小RNA缺失株的構(gòu)建
        4.2 小RNA過(guò)表達(dá)株的構(gòu)建
        4.3 討論
第三章 小RNA生理和毒力的研究
    1. 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 菌株
        2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3 主要試劑
        2.4 主要儀器
        2.5 溶液和培養(yǎng)基的配制
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 鼠疫菌小RNA對(duì)生物膜形成的影響
        3.2 鼠疫菌小RNA對(duì)其生長(zhǎng)的影響
        3.3 鼠疫菌小RNA對(duì)高鹽環(huán)境耐受的影響
        3.4 鼠疫菌小RNA對(duì)酸性環(huán)境耐受的影響
        3.5 小鼠存活實(shí)驗(yàn)
    4. 結(jié)果與分析
        4.1 小RNA對(duì)鼠疫菌生物膜形成的影響
        4.2 小RNA對(duì)鼠疫菌在不同生長(zhǎng)條件下的影響
        4.3 小RNA對(duì)鼠疫菌毒力的影響
        4.4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)菌sRNA對(duì)環(huán)境脅迫的響應(yīng)機(jī)制[J]. 劉福芮,鐘志軍,周紫峣,彭廣能,楊平,王亞萍,廖莉.  微生物學(xué)通報(bào). 2015(10)
[2]地高辛標(biāo)記的Northern blot檢測(cè)鼠疫菌sRNA[J]. 鄧仲良,蘇山春,孟祥榮,吳移謀,楊瑞馥,韓延平.  微生物學(xué)報(bào). 2013(03)
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[4]鼠疫研究進(jìn)展與展望[J]. 周冬生,楊瑞馥.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2010(10)
[5]細(xì)菌中的小RNA[J]. 宋蘭,周先禮,岳俊杰,梁龍.  生物技術(shù)通訊. 2008(04)
[6]利用重組工程技術(shù)標(biāo)記鼠疫菌rpoS基因[J]. 張建山,陳澤良,宋亞軍,郭兆彪,王津,王紅霞,翟俊輝,楊瑞馥.  中國(guó)生物工程雜志. 2006(05)



本文編號(hào)：3436202