背景:乳腺癌是中國女性中最常見的癌癥和第五大癌癥死亡原因,近年來發(fā)病率有所上升。雖然乳腺癌的治療手段非常豐富,但由于腫瘤異質(zhì)性和患者個體的差別,一些患者的遠(yuǎn)期預(yù)后不盡如人意。為了提高乳腺癌患者的長期生存率,一種新的保留腫瘤內(nèi)異質(zhì)性的轉(zhuǎn)化研究模型是必不可少的。人源腫瘤異種移植（patient-derived xenografts,PDX）模型已經(jīng)成為轉(zhuǎn)化研究和腫瘤學(xué)臨床前試驗(yàn)的工具。方法:制定納入標(biāo)準(zhǔn),收集自2017年1月至9月共11例于我院手術(shù)的乳腺癌患者的新鮮腫瘤組織,先進(jìn)行腫瘤組織消化、腫瘤細(xì)胞鏡下觀察,腫瘤細(xì)胞豐富的組織直接進(jìn)行NOG（NOD/Shi-scid,IL-2R null）小鼠原位接種,腫瘤細(xì)胞稀少的組織進(jìn)行3D培養(yǎng)（patient-derived organoids,PDOs）�；颊邩�(biāo)本轉(zhuǎn)接后90天仍無生長跡象的視為實(shí)驗(yàn)失敗,若腫瘤體積達(dá)到500 mm3以上小鼠,則取下腫瘤組織進(jìn)行傳代。定期測量小鼠體重與腫瘤體積。同時根據(jù)測量結(jié)果繪制小鼠體重曲線與腫瘤生長曲線。所有腫瘤組織均進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)分析。結(jié)果:本研究成功建立PDX模型3例,成功率為27.27%。小鼠... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

鏡下腫瘤細(xì)胞計數(shù)(A100倍鏡下腫瘤細(xì)胞豐富的腫瘤組織；B20倍鏡下腫瘤細(xì)胞稀少的腫瘤組織)

μlMatrigel 中，充分混勻后每次吸取 50μl，接種到 12 孔培養(yǎng)板。室溫靜置 5min，細(xì)胞培養(yǎng)箱 37℃培養(yǎng) 15min。后每孔加 3 ml Organoid growth Media，放置 37℃的 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔 2-3 天換液。當(dāng) 70-80%的細(xì)胞生長成腫瘤團(tuán)，可進(jìn)行傳代、小鼠原位種植或凍存。圖 1-1 鏡下腫瘤細(xì)胞計數(shù)(A100 倍鏡下腫瘤細(xì)胞豐富的腫瘤組織；B 20 倍鏡下腫瘤細(xì)胞稀少的腫瘤組織)

在接種前一天，在生物安全柜中將 5 只實(shí)驗(yàn)小鼠剪腳趾編號，并記錄每只老鼠的體重，而后將手術(shù)器械（包括手術(shù)剪、手術(shù)鑷以及轉(zhuǎn)接針）進(jìn)行高壓滅菌處理。接種時，取 3-4 個培養(yǎng)皿，分別加入 PBS 緩沖液、RPMI-1640 培養(yǎng)液、75%酒精，然后將事先滅菌的手術(shù)器械放入 75%酒精中，將腫瘤標(biāo)本從器官保存液中取出放入PBS 緩沖液中沖洗 1-2 遍，轉(zhuǎn)移至 RPMI-1640 培養(yǎng)基內(nèi)（圖 1-2），然后用手術(shù)剪剪切成 3*3*3mm3大小的腫瘤組織塊，將剪好腫瘤組織塊裝入接種針內(nèi)。將乳腺癌組織塊 2-3 塊接種于小鼠的乳墊原位（圖 1-3），接種完成后，將接種針放入呈有酒精的培養(yǎng)皿中，接下來準(zhǔn)備接種下一個點(diǎn)，每只接種 4 個點(diǎn)（右前、左前、右后、左后）直到 4 個點(diǎn)接種完成后，將小鼠放回鼠籠中，開始下一只小鼠接種，5 只小鼠都接種完成后，視為造模過程完成。建模完成后，用套管針在小鼠頸部側(cè)面的皮下植入雌二醇緩釋片（17β-Estradiol，0.36mg，60 天緩釋）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人源腫瘤異種移植模型在精準(zhǔn)腫瘤醫(yī)學(xué)中的研究進(jìn)展[J]. 李克娟,黃昊,高苒.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2017(01)
[2]人乳腺癌PDX模型的研究進(jìn)展[J]. 馬麗君,戰(zhàn)軍,張宏權(quán).  中國科學(xué):生命科學(xué). 2016(06)



本文編號：3424786