目的構(gòu)建及拯救以流感病毒為載體嵌合HCV抗原表位的重組病毒株r HCV/FLU并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法利用反向遺傳學(xué)技術(shù),選擇流感病毒A/Puerto Rico/8/34（PR8）為載體,將HCV 1b亞型的E1抗原基因經(jīng)序列優(yōu)化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,構(gòu)建重組質(zhì)粒p NS1-HCV,測(cè)序正確的重組質(zhì)粒p NS1-HCV與PR8的7個(gè)重組質(zhì)粒p HW191-PB2、p HW192-PB1、p HW193-PA、p HW194-HA、p HW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M轉(zhuǎn)染共培養(yǎng)的COS-1和MDCK細(xì)胞,經(jīng)拯救、篩選、鑒定獲得流感病毒為載體嵌合HCV抗原表位的重組病毒株,命名為r HCV/FLU,并通過血凝試驗(yàn)、RT-PCR、Western blot、電鏡觀察病毒形態(tài)等方法對(duì)重組病毒鑒定。接著,重組病毒接種SPF雞胚擴(kuò)大培養(yǎng)、超濾濃縮、蔗糖密度梯度離心純化。純化獲得的重組病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0 d、14 d免疫2次,設(shè)置104TCID50、105TCID50、106TCID503個(gè)劑量組,初步評(píng)價(jià)其免疫效果。結(jié)果成功拯救重組病毒株... 

【文章來源】：免疫學(xué)雜志. 2016,32(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1質(zhì)粒、細(xì)胞、病毒、雞胚及動(dòng)物
    1.2主要試劑及儀器
    1.3重組pNS1-HCV質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
    1.4 重組病毒拯救
    1.5 重組病毒株的鑒定
        1.5.1血凝試驗(yàn)
        1.5.2 RT-PCR基因鑒定
        1.5.3電鏡觀察
        1.5.4 Western blot鑒定
    1.6 重組病毒r HCV/FLU在MDCK細(xì)胞中的生長(zhǎng)曲線
    1.7 重組病毒株r HCV/FLU動(dòng)物免疫及效果評(píng)價(jià)
        1.7.1 重組病毒株r HCV/FLU的制備
        1.7.2動(dòng)物分組
        1.7.3 動(dòng)物免疫及檢測(cè)
    1.8 血清抗體檢測(cè)
    1.9 細(xì)胞因子檢測(cè)
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒p NS1-HCV的構(gòu)建
    2.2重組病毒株rHCV/FLU病毒的拯救
    2.3 Western blot鑒定
    2.4 電鏡觀察重組病毒r HCV/FLU
    2.5 RT-PCR基因鑒定
    2.6重組病毒rHCV/FLU在MDCK細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線
    2.7 重組病毒r HCV/FLU能夠有效提高血抑抗體效價(jià)
    2.8 重組病毒r HCV/FLU誘導(dǎo)HCV/E1 特異性的細(xì)胞因子
3 討論



本文編號(hào)：3424330