目的構(gòu)建及拯救以流感病毒為載體嵌合HCV抗原表位的重組病毒株r HCV/FLU并對其進行評價。方法利用反向遺傳學技術(shù),選擇流感病毒A/Puerto Rico/8/34（PR8）為載體,將HCV 1b亞型的E1抗原基因經(jīng)序列優(yōu)化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,構(gòu)建重組質(zhì)粒p NS1-HCV,測序正確的重組質(zhì)粒p NS1-HCV與PR8的7個重組質(zhì)粒p HW191-PB2、p HW192-PB1、p HW193-PA、p HW194-HA、p HW195-NP、p HW196-NA、p HW197-M轉(zhuǎn)染共培養(yǎng)的COS-1和MDCK細胞,經(jīng)拯救、篩選、鑒定獲得流感病毒為載體嵌合HCV抗原表位的重組病毒株,命名為r HCV/FLU,并通過血凝試驗、RT-PCR、Western blot、電鏡觀察病毒形態(tài)等方法對重組病毒鑒定。接著,重組病毒接種SPF雞胚擴大培養(yǎng)、超濾濃縮、蔗糖密度梯度離心純化。純化獲得的重組病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0 d、14 d免疫2次,設(shè)置104TCID50、105TCID50、106TCID503個劑量組,初步評價其免疫效果。結(jié)果成功拯救重組病毒株... 

【文章來源】：免疫學雜志. 2016,32(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1質(zhì)粒、細胞、病毒、雞胚及動物
    1.2主要試劑及儀器
    1.3重組pNS1-HCV質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定
    1.4 重組病毒拯救
    1.5 重組病毒株的鑒定
        1.5.1血凝試驗
        1.5.2 RT-PCR基因鑒定
        1.5.3電鏡觀察
        1.5.4 Western blot鑒定
    1.6 重組病毒r HCV/FLU在MDCK細胞中的生長曲線
    1.7 重組病毒株r HCV/FLU動物免疫及效果評價
        1.7.1 重組病毒株r HCV/FLU的制備
        1.7.2動物分組
        1.7.3 動物免疫及檢測
    1.8 血清抗體檢測
    1.9 細胞因子檢測
    1.10 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒p NS1-HCV的構(gòu)建
    2.2重組病毒株rHCV/FLU病毒的拯救
    2.3 Western blot鑒定
    2.4 電鏡觀察重組病毒r HCV/FLU
    2.5 RT-PCR基因鑒定
    2.6重組病毒rHCV/FLU在MDCK細胞的生長曲線
    2.7 重組病毒r HCV/FLU能夠有效提高血抑抗體效價
    2.8 重組病毒r HCV/FLU誘導HCV/E1 特異性的細胞因子
3 討論



本文編號：3424330