人腸道病毒D68型（Human enterovirus D68,EV-D68）屬于小RNA病毒科、腸道病毒屬。1962年,EV-D68在美國加利福尼亞州患有嚴重呼吸道感染的兒童鼻咽拭子中首次被發(fā)現(xiàn),EV-D68可在兒童中引起嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病,嚴重患者會出現(xiàn)急性弛緩性癱瘓等神經(jīng)系統(tǒng)疾病,甚至導致死亡。近年來,EV-D68在全球各地頻繁暴發(fā)。2014年,在美國發(fā)生了迄今為止規(guī)模最大的EV-D68感染,確診病例1153例,死亡14例。然而目前對于EV-D68的研究較少,并且缺少特效的疫苗和有效的治療手段來應對EV-D68感染。因此,對EV-D68進行分子生物學、復制機制和致病機理等深入的研究顯得極為重要。利用反向遺傳學技術(shù)可以在DNA水平對RNA病毒進行改造,從而研究RNA病毒基因組的結(jié)構(gòu)與功能,為病毒的復制機制以及致病機理提供了方法。本研究構(gòu)建了EV-D68 Fermon病毒株的反向遺傳操作系統(tǒng),包括EV-D68微復制子和EV-D68感染性克隆。微復制子是利用螢火蟲熒光素酶報告基因替換EV-D68基因組編碼區(qū)構(gòu)建而成,并分別利用T7 RNA聚合酶和人RNA聚合酶I（Pol I）拯救微復制... 

【文章來源】：天津大學天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

EV-D68基因組結(jié)構(gòu)

圖 3-2 EV-D68 微復制子片段擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果ectropheresis of PCR product amplified with EV-D68 minirepliTR和FLuc-3’UTR為模板，以5’UTR-F1/R3為引物進plicon片段，PCR產(chǎn)物大小約為2500bp。PCR擴增結(jié)圖 3-3 EV-D68 微復制子片段重疊 PCR 電泳結(jié)果Fig.3-3 Electropheresis of overlapping PCR product

3’端插入 3’UTR 和 Poly(A)尾，獲得 FLuc-3’UCR 擴增結(jié)果見圖 3-2。圖 3-2 EV-D68 微復制子片段擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果tropheresis of PCR product amplified with EV-D68 minireR和FLuc-3’UTR為模板，以5’UTR-F1/R3為引物licon片段，PCR產(chǎn)物大小約為2500bp。PCR擴增

【參考文獻】：
期刊論文
[1]腸道病毒71型（EV71）熒光病毒的構(gòu)建[J]. 朱守海,王璐璐.  生物技術(shù)通報. 2014(07)



本文編號：3422790