人腸道病毒D68型（Human enterovirus D68,EV-D68）屬于小RNA病毒科、腸道病毒屬。1962年,EV-D68在美國(guó)加利福尼亞州患有嚴(yán)重呼吸道感染的兒童鼻咽拭子中首次被發(fā)現(xiàn),EV-D68可在兒童中引起嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病,嚴(yán)重患者會(huì)出現(xiàn)急性弛緩性癱瘓等神經(jīng)系統(tǒng)疾病,甚至導(dǎo)致死亡。近年來(lái),EV-D68在全球各地頻繁暴發(fā)。2014年,在美國(guó)發(fā)生了迄今為止規(guī)模最大的EV-D68感染,確診病例1153例,死亡14例。然而目前對(duì)于EV-D68的研究較少,并且缺少特效的疫苗和有效的治療手段來(lái)應(yīng)對(duì)EV-D68感染。因此,對(duì)EV-D68進(jìn)行分子生物學(xué)、復(fù)制機(jī)制和致病機(jī)理等深入的研究顯得極為重要。利用反向遺傳學(xué)技術(shù)可以在DNA水平對(duì)RNA病毒進(jìn)行改造,從而研究RNA病毒基因組的結(jié)構(gòu)與功能,為病毒的復(fù)制機(jī)制以及致病機(jī)理提供了方法。本研究構(gòu)建了EV-D68 Fermon病毒株的反向遺傳操作系統(tǒng),包括EV-D68微復(fù)制子和EV-D68感染性克隆。微復(fù)制子是利用螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因替換EV-D68基因組編碼區(qū)構(gòu)建而成,并分別利用T7 RNA聚合酶和人RNA聚合酶I（Pol I）拯救微復(fù)制... 

【文章來(lái)源】：天津大學(xué)天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

EV-D68基因組結(jié)構(gòu)

圖 3-2 EV-D68 微復(fù)制子片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果ectropheresis of PCR product amplified with EV-D68 minirepliTR和FLuc-3’UTR為模板，以5’UTR-F1/R3為引物進(jìn)plicon片段，PCR產(chǎn)物大小約為2500bp。PCR擴(kuò)增結(jié)圖 3-3 EV-D68 微復(fù)制子片段重疊 PCR 電泳結(jié)果Fig.3-3 Electropheresis of overlapping PCR product

3’端插入 3’UTR 和 Poly(A)尾，獲得 FLuc-3’UCR 擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)圖 3-2。圖 3-2 EV-D68 微復(fù)制子片段擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果tropheresis of PCR product amplified with EV-D68 minireR和FLuc-3’UTR為模板，以5’UTR-F1/R3為引物licon片段，PCR產(chǎn)物大小約為2500bp。PCR擴(kuò)增

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腸道病毒71型（EV71）熒光病毒的構(gòu)建[J]. 朱守海,王璐璐.  生物技術(shù)通報(bào). 2014(07)



本文編號(hào)：3422790