目的研究鼠疫耶爾森菌PhoP/PhoQ在不同培養(yǎng)條件下的自調(diào)控關(guān)系。方法 PCR擴增YPO1635啟動子區(qū)DNA序列,并克隆入pRW50質(zhì)粒β-半乳糖苷酶基因的上游,構(gòu)建LacZ重組質(zhì)粒,進而將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入鼠疫菌野生株（WT）和phoP突變株（ΔphoP）中,通過測定二者中β-半乳糖苷酶活性差異來判定PhoP對YPO1635的調(diào)控關(guān)系。提取WT和ΔphoP的總RNA,采用引物延伸實驗研究phoP的轉(zhuǎn)錄起始位點,并根據(jù)產(chǎn)物的豐度判斷PhoP對phoP的調(diào)控關(guān)系。結(jié)果 LacZ結(jié)果表明,在低Mg²⁺TMH和BHI培養(yǎng)基中,PhoP能激活YPO1635的轉(zhuǎn)錄,而在高Mg²⁺TMH中,PhoP對YPO1635的轉(zhuǎn)錄無調(diào)控作用。引物延伸結(jié)果顯示,phoP有兩個轉(zhuǎn)錄起始位點G（-90）和A（-118）（分別記為P1和P2,翻譯起始位點為+1）,在低Mg²⁺TMH中,PhoP能激活P1的轉(zhuǎn)錄,而對P2無調(diào)控作用;在高Mg²⁺TMH中,PhoP對二者均無調(diào)控作用;在BHI中,PhoP對二者的轉(zhuǎn)錄均具抑制作用。結(jié)論... 

【文章來源】：軍事醫(yī)學. 2017,41(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
    1.2 鼠疫菌培養(yǎng)
        1.2.1 在H-TMH或BHI中培養(yǎng)方式[12, 13]
        1.2.2 在L-TMH中培養(yǎng)方式[13]
    1.3 Lac Z報告基因融合實驗
    1.4 引物延伸實驗
    1.5 統(tǒng)計學處理
2 結(jié)果
    2.1 Pho P對YPO1635的調(diào)控
    2.2 Pho P對自身基因的調(diào)控
    2.3 pho PQ操縱子結(jié)構(gòu)
3 討論



本文編號：3412604