目的:牽張成骨具有骨折愈合不可比擬的成骨速率,但至今其成骨機(jī)制尚未明了。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells,EPCs）表面標(biāo)記物CD133在牽張成骨新骨區(qū)域具有較高的表達(dá),期間可能存在EPCs參與的血管發(fā)生機(jī)制;并且,利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)牽張成骨區(qū)域、胚胎骨、骨折斷端等組織的miRNAs進(jìn)行表達(dá)量聚類(lèi)分析,發(fā)現(xiàn)miRNA-21,miRNA-10,miRNA-451,mi RNA-27b,mi RNA-486,miRNA-205在牽張成骨區(qū)域及胚胎骨中具有共同表達(dá)。因此,我們推測(cè)上述miRNAs可能通過(guò)調(diào)控靶基因進(jìn)而調(diào)控EPCs血管發(fā)生,從而促進(jìn)新骨形成。本實(shí)驗(yàn)擬從miRNA的角度初步探索EPCs成血管分化機(jī)制。方法:1.EPCs體外分離培養(yǎng)、鑒定及成血管能力檢測(cè)的研究:抽取3W齡幼犬骨髓約5ml,采用密度梯度離心法分離獲取EPCs后:（1）通過(guò)倒置像差顯微鏡下觀察EPCs的形態(tài)學(xué)特點(diǎn);（2）通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)EPCs表面標(biāo)志物;（3）通過(guò)細(xì)胞周期流式分析檢測(cè)EPCs增殖能力;（4）通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)E... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

培養(yǎng)第5-7d細(xì)胞形態(tài)(A,B×400)

流式細(xì)胞儀檢測(cè) EPCs 表面標(biāo)志的結(jié)果經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)所分離培養(yǎng)的犬 EPCs 可表達(dá)表面抗圖 1-3 培養(yǎng) 14-21d 細(xì)胞形態(tài)(A, B×400)Fig.1-3 Cell morphology after culture 14-21d (A, B×400)

3）培養(yǎng)至 14-21d 時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞間形成集落，呈多個(gè)克渦狀生長(zhǎng)，最終呈現(xiàn)管腔結(jié)構(gòu)，具有明顯的成血管傾向(圖 1-3)。圖 1-2 7-10d 傳代后細(xì)胞形態(tài)(A, B×400)Fig.1-2 After 7-10d, the cells were passed into the postnatal form (A, B×400)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]機(jī)械離心力對(duì)成骨細(xì)胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白信號(hào)通路中Runx-2 mRNA的影響[J]. 段峰,關(guān)鍵,楊紅巖,王心彧,張國(guó)梁,朱楊.  中國(guó)組織工程研究. 2014(33)
[2]牽張成骨研究中的幾個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題[J]. 周諾.  口腔頜面外科雜志. 2011(04)
[3]Endothelial progenitor cells as factors in neovascularization and endothelial repair[J]. Stefano Capobianco,Venu Chennamaneni,Mayank Mittal.  World Journal of Cardiology. 2010(12)



本文編號(hào)：3408307