溶瘤病毒是一類具有復(fù)制能力,經(jīng)改造后可靶向殺死腫瘤細(xì)胞的病毒,對腫瘤具有特殊趨向性,因此溶瘤病毒療法是近些年治療腫瘤疾病的研究熱點(diǎn)。由于單純皰疹Ⅰ型（Herpes simplex virus 1,HSV-1）在人群中帶菌率高,病毒毒力較小,易于構(gòu)建重組病毒等優(yōu)勢,因此HSV-1是目前溶瘤病毒研究的熱點(diǎn)之一。由HSV-1改造而成的溶瘤單純皰疹病毒（oHSV）亦是FDA首次批準(zhǔn)的溶瘤病毒,應(yīng)用于晚期黑色素瘤的治療,并將此溶瘤病毒藥物命名為talimogene laherparepvec（T-Vec,Imlygic,安進(jìn)公司）^[1]。當(dāng)oHSV用于治療腫瘤患者過程中,宿主對于其所引起的反應(yīng)是復(fù)雜多樣的,其中細(xì)胞因子風(fēng)暴則是最為嚴(yán)重的不良反應(yīng)之一。一旦細(xì)胞因子風(fēng)暴發(fā)生,腫瘤患者由于自身內(nèi)環(huán)境紊亂及免疫功能低下,可導(dǎo)致更為嚴(yán)重的免疫病理損傷。細(xì)胞因子信號(hào)抑制蛋白（Suppressors of cytokine signaling,SOCS）家族是一類細(xì)胞因子信號(hào)通路抑制蛋白,是JAK-STAT信號(hào)通路的主要負(fù)調(diào)控蛋白。SOCS蛋白與病毒感染以及器官損傷具有密切的聯(lián)系,其中,... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pKO-SOCS4酶切位點(diǎn)示意圖

pKO-SOCS4載體結(jié)構(gòu)圖

經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳顯示在Maker 1000~2000 之上有一條帶，與 SOCS4 理論值1397bp相符（圖1-3）。圖 1-3：EX-T3502-M02-5 的 SOCS4 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物（1.0%瓊脂糖凝膠電泳）Fig 1-3 PCR amplification of SOCS4 from EX-T3502-M02-52、BAC-SOCS4 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建2.1 將回收的擴(kuò)增產(chǎn)物及原核表達(dá)載體 T-easy 進(jìn)行連接反應(yīng)，構(gòu)建 T-SOCS4 重組質(zhì)粒。2.2 原核表達(dá)載體 T-SOCS4 以及 pNEWUL 分別用 AccI 和 NotI 進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物純化后用 T4DNA 連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，構(gòu)建 p-SOCS4 重組質(zhì)粒。2.3 原核表達(dá)載體 p-SOCS4 以及 Pko5.1 分別用 BglⅡ和 PacI 進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物純化后用 T4DNA 連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，構(gòu)建 Pko-SOCS4 重組質(zhì)粒。2.4 以 UL3、UL4 作為 SOCS4 基因兩端的同源臂，以同源重組的方式將 SOCS4基因重組進(jìn) BAC-HSV-1 質(zhì)粒中。圖 2-4 所示，重組質(zhì)粒經(jīng) PCR 鑒定


本文編號(hào)：3381278