本文關(guān)鍵詞：缺氧預(yù)處理后骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合BDNF治療大鼠腦梗塞模型的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究缺氧預(yù)處理后骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞(BMSCs-NSCs)聯(lián)合腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)立體定向移植治療大鼠腦梗塞損傷的療效;以及BMSCs-NSCs在體內(nèi)外分化的特性,為高原地區(qū)腦梗塞的細(xì)胞移植治療提供動物實驗基礎(chǔ)。方法:將72只SD大鼠隨機(jī)分為缺氧預(yù)處理組和常氧兩大組各36只,缺氧預(yù)處理組造模前先行急性低氧預(yù)處理(HPC)(模擬海拔5000m高度的低壓氧艙行3d,每天3h),大腦中動脈阻塞再灌注(MCAO/R)模型成功后每個大組再分成三個亞組,每個亞組各12只,A組:BMSCs-NSCs+BDNF移植組;B組:BMSCs-NSCs移植組;C組:對照組(僅注射DMEM/F12培養(yǎng)基)。分別通過立體定向儀移移植入梗塞同側(cè)尾狀核內(nèi),并于3、7、14、21、28、35d進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分(包括平衡木測試、行走測試、抓握測試),斷頭取腦后再從形態(tài)學(xué)(梗死灶大小的變化)及組織學(xué)(免疫組織化學(xué)及免疫熒光染色)了解骨髓源性神經(jīng)球分化情況,進(jìn)行療效觀察。結(jié)果： 1.BMSCs在體外聯(lián)合應(yīng)用堿性成纖維生長因子(b FGF)、表皮生長因子(EGF)及B27誘導(dǎo)下形成的細(xì)胞球經(jīng)CD133和Nestin檢測證實為BMSCs-NSCs(本實驗誘導(dǎo)成功)。2.BMSCs-NSCs經(jīng)Nestin、MAP-2、GFAP、Galc抗原免疫熒光染色均呈陽性表達(dá),證實SD大鼠BMSCs-NSCs在體外均能分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞。3.體外BMSCs-NSCs分裂速度與培養(yǎng)基胎牛血清(FBS)相關(guān),10%FBS和10%FBS+50ng/m L BDNF組分化為神經(jīng)元比例分別為(22±2.4)個,(31±1.7)個,(P0.01),故添加BDNF可提高分化為神經(jīng)元比例,熒光倒置顯微鏡下觀察到添加BDNF后BMSCs-NSCs突觸數(shù)目增多、長度增加,并促進(jìn)連接。4.移植后大鼠神經(jīng)功能第14d即開始明顯改善,而第21d梗塞區(qū)遷移入Badu陽性表達(dá)細(xì)胞最多,但這些標(biāo)志物的表達(dá)仍主要集中于細(xì)胞移植區(qū),以GFAP表達(dá)陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞為主。5.缺氧各組與對應(yīng)常氧各組各檢測指標(biāo)間無顯著性差異(P0.05)。無論缺氧處理組、還是常氧組,BMSCs-NSCs+BDNF組各檢測指標(biāo)間均顯著高于BMSCs-NSCs組(P0.05);BMSCs-NSCs+BDNF組、BMSCs-NSCs植組各檢測指標(biāo)均高于對照組(P0.05)。 結(jié)論: 1.BMSCs在體外可誘導(dǎo)分化成BMSCs-NSCs,且在體內(nèi)外均具有多向分化特性,可被誘導(dǎo)分化成神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。2.體外BMSCs-NSCs分裂速度與培養(yǎng)基FBS一定濃度相關(guān),BDNF在體內(nèi)外均可顯著提高分化為神經(jīng)元的比例,在體外可增加BMSCs-NSCs突觸數(shù)目、長度與突觸連接,而在體內(nèi)可促進(jìn)功能性突觸聯(lián)系。3.移植14d后大鼠神經(jīng)功能開始明顯改善,而21d左右到達(dá)梗塞區(qū)內(nèi)及分化的BMSCs-NSCs最多。添加BDNF可顯著提高移植的療效。4.缺氧預(yù)處理并不能促進(jìn)外源性BMSCs-NSCs分化,但卻能明顯改善大鼠神經(jīng)功能,缺氧預(yù)處理可能促進(jìn)了內(nèi)源性NSCs的增殖和分化。
【關(guān)鍵詞】：缺氧預(yù)處理 骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞 BDNF 立體定向移植
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 材料與方法14-21
• 2.1 實驗材料14-15
• 2.1.1 實驗動物14
• 2.1.2 主要試劑14-15
• 2.1.3 主要儀器15
• 2.1.4 主要溶液配制15
• 2.2 實驗方法15-21
• 2.2.1 BMSCs-NSCs的分離、培養(yǎng)15-17
• 2.2.2 大腦中動脈缺血再灌注損傷模型的建立17
• 2.2.3 缺氧預(yù)處理17-18
• 2.2.4 實驗分組18
• 2.2.5 骨髓源性神經(jīng)球立體定向移植治療大鼠缺血再灌注模型18
• 2.2.6 形態(tài)學(xué)及組織學(xué)觀察18-20
• 2.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析20-21
• 第3章 結(jié)果21-27
• 3.1 BMSCs的形態(tài)觀察21
• 3.1.1 原代培養(yǎng)21
• 3.1.2 傳代后21
• 3.2 骨髓源性球的形態(tài)觀察21
• 3.3 骨髓源性神經(jīng)球的CD133和Nestin檢測結(jié)果21-22
• 3.4 BMSCs-NSCs的體外分化22
• 3.4.1 細(xì)胞形態(tài)及陽性細(xì)胞率22
• 3.4.2 移植骨髓源神經(jīng)球的分化能力22
• 3.5 移植治療后療效觀察22-27
• 3.5.1 BMSCs-NSCs的Brdu標(biāo)記及遷移22-23
• 3.5.2 各治療組大鼠神經(jīng)功能評定23-24
• 3.5.3 BMSCs-NSCs在梗塞區(qū)的分化24-25
• 3.5.4 各治療組不同時間點大鼠腦梗塞面積的觀察(HE染色)25-27
• 第4章 討論27-31
• 4.1 BMSCs-NSCs的體外分化特點及影響因素27
• 4.2 BMSCs-NSCs在體內(nèi)遷移特點27-28
• 4.3 移植治療各組大鼠神經(jīng)功能評定與梗塞面積的觀察 (HE染色)28
• 4.4 BMSCs-NSCs的體內(nèi)分化特點28-29
• 4.5 大鼠缺氧預(yù)處理與常氧組療效觀察29-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 附錄34-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 致謝50-51
• 作者簡歷51

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本文編號：337159