目的使用四環(huán)素操縱子（Tet-on）可控表達系統(tǒng)研究細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^INK4a)對MCF7乳腺癌細胞形態(tài)及細胞骨架的影響。方法以p16^INK4a表達缺失的MCF7乳腺癌細胞為宿主細胞,用慢病毒通過"兩步感染法"建立MCF7-p Tet-on-p16^INK4a可誘導表達細胞系,加入誘導劑強力霉素（Dox）誘導目的基因表達;細胞計數(shù)檢測細胞生長變化;采用免疫細胞化學染色檢測上皮鈣黏素（E-cadherin）表達,采用鬼筆環(huán)肽（phalloidin）標記纖維型肌動蛋白（F-actin）,觀察p16^INK4a對細胞間黏附連接、細胞骨架的影響;用顯微鏡對細胞拍照后,用Image J軟件進行形態(tài)分析。結果成功建立了可誘導表達p16^INK4a的MCF7穩(wěn)定細胞系,Dox可以有效誘導p16^INK4a的表達;誘導條件下穩(wěn)定表達p16^INK4a的MCF7細胞增殖受抑制,細胞體積增大,輪廓線延長;而對照MCF7細胞F... 

【文章來源】：細胞與分子免疫學雜志. 2017,33(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 反應質粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的構建
        1.2.2 慢病毒包裝、感染
        1.2.3 MCF7-p Tet-on的單克隆細胞株篩選
        1.2.4 Western blot法檢測MCF7細胞中Tet R、p16INK4a、tubulin、E-cadherin蛋白表達水平
        1.2.5 免疫熒光細胞化學染色檢測MCF7細胞p16INK4a、F-actin及E-cadherin的表達分布
2 結果
    2.1 反應質粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的構建
    2.2 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可誘導表達系統(tǒng)的建立
    2.3 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可誘導表達系統(tǒng)的檢測
    2.4 乳腺癌MCF7細胞過表達p16INK4a影響細胞骨架的重新分布
3 討論



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