發(fā)布時(shí)間：2021-08-28 11:28

　　目的使用四環(huán)素操縱子（Tet-on）可控表達(dá)系統(tǒng)研究細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A/p16^INK4a)對(duì)MCF7乳腺癌細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞骨架的影響。方法以p16^INK4a表達(dá)缺失的MCF7乳腺癌細(xì)胞為宿主細(xì)胞,用慢病毒通過"兩步感染法"建立MCF7-p Tet-on-p16^INK4a可誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞系,加入誘導(dǎo)劑強(qiáng)力霉素（Dox）誘導(dǎo)目的基因表達(dá);細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)變化;采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)上皮鈣黏素（E-cadherin）表達(dá),采用鬼筆環(huán)肽（phalloidin）標(biāo)記纖維型肌動(dòng)蛋白（F-actin）,觀察p16^INK4a對(duì)細(xì)胞間黏附連接、細(xì)胞骨架的影響;用顯微鏡對(duì)細(xì)胞拍照后,用Image J軟件進(jìn)行形態(tài)分析。結(jié)果成功建立了可誘導(dǎo)表達(dá)p16^INK4a的MCF7穩(wěn)定細(xì)胞系,Dox可以有效誘導(dǎo)p16^INK4a的表達(dá);誘導(dǎo)條件下穩(wěn)定表達(dá)p16^INK4a的MCF7細(xì)胞增殖受抑制,細(xì)胞體積增大,輪廓線延長(zhǎng);而對(duì)照MCF7細(xì)胞F... 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017,33(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 反應(yīng)質(zhì)粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的構(gòu)建
        1.2.2 慢病毒包裝、感染
        1.2.3 MCF7-p Tet-on的單克隆細(xì)胞株篩選
        1.2.4 Western blot法檢測(cè)MCF7細(xì)胞中Tet R、p16INK4a、tubulin、E-cadherin蛋白表達(dá)水平
        1.2.5 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)MCF7細(xì)胞p16INK4a、F-actin及E-cadherin的表達(dá)分布
2 結(jié)果
    2.1 反應(yīng)質(zhì)粒p LVX-Tight-puro-p16INK4a的構(gòu)建
    2.2 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的建立
    2.3 MCF7-p Tet-on-p16INK4a可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的檢測(cè)
    2.4 乳腺癌MCF7細(xì)胞過表達(dá)p16INK4a影響細(xì)胞骨架的重新分布
3 討論



本文編號(hào)：3368428