免疫球蛋白Fc受體（FcR）能與抗體的Fc段結(jié)合并介導(dǎo)一系列的細(xì)胞反應(yīng),在機(jī)體的免疫防御中發(fā)揮重要作用。人Fcα/μR （CD351）是一種能特異性結(jié)合IgA和IgM兩種配體的Fc受體,屬Ⅰ型跨膜糖蛋白,其膜外區(qū)含三個結(jié)構(gòu)域,即EC1,EC2和EC3。其中EC2為免疫球蛋白可變區(qū)樣結(jié)構(gòu),與同為IgA和IgM受體的多聚免疫球蛋白受體（pIgR）的D1結(jié)構(gòu)域在氨基酸序列上有43%的同源性,是預(yù)測的配體結(jié)合功能域。本研究的目的是探討人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域中參與結(jié)合IgA和IgM的氨基酸位點,以便了解該受體的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系。為了能夠了解Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域中功能氨基酸的位點,我們首先用序列比對和同源建模的方法借用pIgR-D1的晶體結(jié)構(gòu)模擬出Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域的空間結(jié)構(gòu),推測出APSSVNRHQ, STNQY, SENNM為相應(yīng)的三個CDR樣環(huán),其位置顯示它們均可能參與受體與配體的結(jié)合。為了實際觀察Fcα/μR-EC2與配體的結(jié)合情況,我們首先對所預(yù)測的三個CDR樣環(huán)分別用無配體結(jié)合功能的pIgR-D2結(jié)構(gòu)域中的相應(yīng)CDR樣環(huán)取代。利用拼接聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（SOE-PCR）... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞英漢對照表
前言
實驗材料
    一、主要化學(xué)試劑
    二、抗體
    三、細(xì)胞系
    四、工具酶、分子量標(biāo)準(zhǔn)及試劑盒
    五、質(zhì)粒載體
    六、菌株
    七、儀器設(shè)備
    八、軟件
實驗方法
    [分子生物學(xué)相關(guān)實驗]
        一、常規(guī)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        二、哺乳動物細(xì)胞的凍存、復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染
        三、建立穩(wěn)定細(xì)胞株
    [免疫學(xué)相關(guān)實驗]
        一、熒光流式細(xì)胞分析技術(shù)
        二、激光掃描共聚焦顯微鏡
        三、蛋白質(zhì)的SDS-PAGE梯度凝膠電泳
        四、濕轉(zhuǎn)法Western Blot
實驗結(jié)果
    1. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域的同源建模
    2. 野生型人Fcα/μR在真核細(xì)胞上的表達(dá)及配體結(jié)合鑒定
    3. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域中三個CDR樣環(huán)對人Fcα/μR配體結(jié)合能力的影響
        3.1. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域CDR樣環(huán)置換突變體的構(gòu)建
        3.2. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域CDR樣環(huán)置換突變體的表達(dá)
        3.3. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域三個CDR樣環(huán)對結(jié)合IgA的影響
        3.4. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域三個CDR樣環(huán)對結(jié)合IgM的影響
    4. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域CDR樣環(huán)內(nèi)氨基酸對人Fcα/μR配體結(jié)合能力的影響
        4.1. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域CDR樣環(huán)內(nèi)點突變受體的構(gòu)建
        4.2. CDR1、CDR2樣環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)氨基酸對人Fcα/μR結(jié)合IgA的影響
        4.3. CDR1、CDR2樣環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)氨基酸對人Fcα/μR結(jié)合IgM的影響
        4.4. CDR3樣環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)氨基酸對人Fcα/μR結(jié)合IgA的影響
        4.5. CDR3樣環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)氨基酸對人Fcα/μR結(jié)合IgM的影響
結(jié)論
討論
    1. 人Fcα/μR-EC2結(jié)構(gòu)域CDR樣環(huán)對配體結(jié)合的影響
    2. 人Fcα/μR在IgM上結(jié)合位點的推測
    3. 對實驗研究方法的考慮
        3.1. 同源建模輔助蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的研究
        3.2. 人Fcα/μR突變體構(gòu)建方法的選擇
        3.3. 人Fcα/μR表達(dá)細(xì)胞系的選擇
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄Ⅰ 質(zhì)粒載體圖譜和多克隆位點
    附錄Ⅱ 人fcamr突變實驗引物序列表
    附錄Ⅲ 氨基酸縮寫對照表
    附錄Ⅳ 人fcamr核苷酸序列
    附錄Ⅴ 人Fcα/μR氨基酸序列
    附錄Ⅵ 人pigr核苷酸序列
    附錄Ⅶ 人pIgR氨基酸序列
    附錄Ⅷ 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個人簡歷



本文編號：3367274