藥物的生物學(xué)活性評價,是藥物研究開發(fā)過程中的重要環(huán)節(jié),是判定藥物是否具有研究價值及確定研究方向的關(guān)鍵評價點。對重組抗體進(jìn)行體外生物學(xué)活性評價,可為產(chǎn)品的工藝研究優(yōu)化提供方向,保證生產(chǎn)過程中的質(zhì)量把控。本論文以重組人源化抗CD52單克隆抗體為目標(biāo)藥物,建立和優(yōu)化ATP法測定藥物補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性（CDC）的檢測方法。重組人源化抗CD52單克隆抗體是仿制國外已上市藥物Campath研究開發(fā),測定抗體CDC活性時,以Campath作為參考對照品,以兩者的相對CDC活性來評價本抗體的生物學(xué)活性。ATP法測定抗體CDC活性基于使用熒光素酶系統(tǒng)對三磷酸腺苷（ATP）濃度的測定,由于ATP在細(xì)胞死亡后迅速降解,其濃度與細(xì)胞數(shù)量有關(guān),同時熒光素光的強(qiáng)度又與ATP濃度呈線性關(guān)系。生物測定中由于各個水平的偏差趨勢可對測定結(jié)果產(chǎn)生巨大影響,因此對各因素偏差趨勢的限制有助于提高方法的準(zhǔn)確性,通過對靶細(xì)胞的研究篩選,選取最適合該檢測的目標(biāo)細(xì)胞,對反應(yīng)體系,標(biāo)準(zhǔn)曲線、補(bǔ)體等關(guān)鍵因素進(jìn)行優(yōu)化,得到穩(wěn)定精確的檢測方法并進(jìn)行驗證。結(jié)果將單克隆抗體酶解后,利用液相色譜儀分離檢測各肽段,兩種抗體液相圖譜表現(xiàn)一致,CDR區(qū)的保... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

三批重組人源化抗CD52單克隆抗體與Campath糖型疊加圖譜

圖 2-1 三批重組人源化抗 CD52 單克隆抗體與 Campath 糖型疊加圖譜Fig.2-1 Three batches of recombinant humanized anti-CD52 monoclonal antibody andCampath glycoform overlay單克隆抗體的糖基是生物學(xué)活性的關(guān)鍵因素，有介導(dǎo)受體識別的作用，且關(guān)系到藥物的安全有效性，因此分析糖基結(jié)構(gòu)是質(zhì)量研究和控制的重要部分。重組人源化抗 CD52 單克隆抗體與 Campath 糖基的圖譜見圖 2-1，從色譜圖中可以看出三批重組人源化抗 CD52 單克隆抗體與 Campath 的峰形一致。2.3.2. HPLC 法測定肽圖譜

20c)Ramos 細(xì)胞生長曲線c) Ramos growth curve圖 3-1 靶細(xì)胞系生長曲線Fig.3-1 Growth curve of target cell line生物學(xué)活性實驗要求細(xì)胞狀態(tài)處于對數(shù)生長期。HUT78、MC/CAR、Ram胞均為懸浮生長型細(xì)胞系，因此以搖瓶生長狀態(tài)測定細(xì)胞生長曲線。取種子胞解凍復(fù)蘇后，至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，在 37 度 5%CO2中靜置培養(yǎng)，確定細(xì)胞好后，轉(zhuǎn)移至搖瓶培養(yǎng)，每 24 小時計數(shù)一次，連續(xù)計數(shù) 7 天后，可得到細(xì)胞曲線如圖 3-1 所示。根據(jù)三種細(xì)胞系的生長曲線可發(fā)現(xiàn)，HUT78 細(xì)胞生長速顯快于 MC/CAR 及 Ramos 細(xì)胞，并且最高細(xì)胞密度也高于另兩種細(xì)胞，最高


本文編號：3366658