MiR-92a-3p R +1和miR-92a-1-5p在ox-LDL誘導(dǎo)大鼠VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖中的作用
發(fā)布時(shí)間：2021-08-23 22:25
目的探討miR-92a-3pR+1和miR-92a-1-5p在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）表型轉(zhuǎn)化和增殖中的作用及其與ERK1/2信號(hào)通路的相關(guān)性。方法分離、培養(yǎng)大鼠VSMC,以ox-LDL（50 mg/L）誘導(dǎo)VSMC,采用ERK1/2特異性抑制劑U0126（10μmol/L）阻斷ox-LDL（50 mg/L）誘導(dǎo)VSMC的ERK1/2信號(hào)激活,MicroRNA微陣列分析VSMC的miR-92a-3pR+1和miR-92a-1-5p表達(dá),CCK-8法和Brdu流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖;免疫熒光法檢測(cè)VSMC收縮表型標(biāo)志蛋白SM22α的變化;Western blot檢測(cè)VSMC的ERK1/2通路信號(hào)激活情況（ERK、p-ERK）、表型標(biāo)志蛋白SM22α、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（PCNA、cyclin D1、p21、p27）的表達(dá)情況。結(jié)果 ox-LDL誘導(dǎo)下,VSMC的miR-92a-3pR+1和miR-92a-1-5p表達(dá)明顯上調(diào),VSMC的ERK1/2磷酸化水平明顯增加,SM22α的表...
【文章來源】：中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2019,27(11)
【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)
【部分圖文】：
．原代大鼠平滑肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)與免疫熒光鑒定A為普通顯微鏡下細(xì)胞交織融合成“谷峰狀”(100×);B為熒光顯微鏡下α-SMA陽性表達(dá)(200×)
92a-1-5p的調(diào)控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(guān)(圖3)，但其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達(dá)Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對(duì)照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達(dá)水平a為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對(duì)VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關(guān)系CCK-8法和Brdu流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖(圖4、圖5)。與空白對(duì)照組比較，ox-LDL誘導(dǎo)促進(jìn)VSMC細(xì)胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細(xì)胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白SM22α表達(dá)的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號(hào)通路后，SM22α蛋白表達(dá)水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預(yù)測(cè)miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖相關(guān)Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測(cè)VSMC增殖a為P＜0．0
92a-1-5p的調(diào)控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(guān)(圖3)，但其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達(dá)Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對(duì)照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達(dá)水平a為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對(duì)VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關(guān)系CCK-8法和Brdu流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖(圖4、圖5)。與空白對(duì)照組比較，ox-LDL誘導(dǎo)促進(jìn)VSMC細(xì)胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細(xì)胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白SM22α表達(dá)的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號(hào)通路后，SM22α蛋白表達(dá)水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預(yù)測(cè)miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖相關(guān)Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測(cè)VSMC增殖a為P＜0．0
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MiR-92a通過靶向抑制PTEN的表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖以及遷移[J]. 趙曦雯,張玉梅. 成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]ERK1/2對(duì)低氧大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Kv1.5通道表達(dá)的影響[J]. 王園園,鄭夢(mèng)曉,趙美平,黃林靜,王萬鐵. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2015(05)
[3]24-乙酰澤瀉醇A對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)大鼠VSMC表型轉(zhuǎn)化的影響及其與ERK1/2通路的關(guān)系[J]. 周曉茂,魏偉,陳彤,鄧陽陽,薛偕華. 中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2015(04)
[4]Mechanisms simultaneously regulate smooth muscle proliferation and differentiation[J]. Ning Shi,Shi-You Chen. The Journal of Biomedical Research. 2014(01)
[5]細(xì)胞周期蛋白D與細(xì)胞周期調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 李峰,陳臨溪. 國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè)). 2005(03)
[6]大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞E1A激活基因阻遏子的表達(dá)變化[J]. 韓雅玲,王效增,康建,劉海偉,李少華. 中華心血管病雜志. 2004(01)
碩士論文
[1]MLCK通過miRNA-92a調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移[D]. 張晨旭.大連醫(yī)科大學(xué) 2016
本文編號(hào)：3358699
【文章來源】：中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2019,27(11)
【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)
【部分圖文】：
．原代大鼠平滑肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)與免疫熒光鑒定A為普通顯微鏡下細(xì)胞交織融合成“谷峰狀”(100×);B為熒光顯微鏡下α-SMA陽性表達(dá)(200×)
92a-1-5p的調(diào)控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(guān)(圖3)，但其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達(dá)Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對(duì)照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達(dá)水平a為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對(duì)VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關(guān)系CCK-8法和Brdu流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖(圖4、圖5)。與空白對(duì)照組比較，ox-LDL誘導(dǎo)促進(jìn)VSMC細(xì)胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細(xì)胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白SM22α表達(dá)的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號(hào)通路后，SM22α蛋白表達(dá)水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預(yù)測(cè)miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖相關(guān)Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測(cè)VSMC增殖a為P＜0．0
92a-1-5p的調(diào)控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(guān)(圖3)，但其相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達(dá)Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對(duì)照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達(dá)水平a為P＜0．05，與空白對(duì)照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對(duì)VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關(guān)系CCK-8法和Brdu流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖(圖4、圖5)。與空白對(duì)照組比較，ox-LDL誘導(dǎo)促進(jìn)VSMC細(xì)胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細(xì)胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達(dá)降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化標(biāo)記蛋白SM22α表達(dá)的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達(dá)水平較空白對(duì)照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號(hào)通路后，SM22α蛋白表達(dá)水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預(yù)測(cè)miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉(zhuǎn)化和增殖相關(guān)Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測(cè)VSMC增殖a為P＜0．0
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MiR-92a通過靶向抑制PTEN的表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖以及遷移[J]. 趙曦雯,張玉梅. 成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]ERK1/2對(duì)低氧大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Kv1.5通道表達(dá)的影響[J]. 王園園,鄭夢(mèng)曉,趙美平,黃林靜,王萬鐵. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2015(05)
[3]24-乙酰澤瀉醇A對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)大鼠VSMC表型轉(zhuǎn)化的影響及其與ERK1/2通路的關(guān)系[J]. 周曉茂,魏偉,陳彤,鄧陽陽,薛偕華. 中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2015(04)
[4]Mechanisms simultaneously regulate smooth muscle proliferation and differentiation[J]. Ning Shi,Shi-You Chen. The Journal of Biomedical Research. 2014(01)
[5]細(xì)胞周期蛋白D與細(xì)胞周期調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 李峰,陳臨溪. 國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè)). 2005(03)
[6]大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞E1A激活基因阻遏子的表達(dá)變化[J]. 韓雅玲,王效增,康建,劉海偉,李少華. 中華心血管病雜志. 2004(01)
碩士論文
[1]MLCK通過miRNA-92a調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖與遷移[D]. 張晨旭.大連醫(yī)科大學(xué) 2016
本文編號(hào)：3358699
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