細(xì)胞衰老定義為不可逆的細(xì)胞周期阻滯,在腫瘤發(fā)生,機(jī)體衰老和胚胎發(fā)育等多種生物過程中起重要作用。細(xì)胞衰老是一個(gè)復(fù)雜的過程,參與調(diào)控的因素多種多樣且彼此間相互影響,構(gòu)成龐大精細(xì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。近年來,不少研究證實(shí)衰老細(xì)胞發(fā)生了顯著的代謝改變,反之細(xì)胞代謝的中間產(chǎn)物在細(xì)胞衰老過程中也發(fā)揮重要作用。本文研究糖酵解最后一步:磷酸烯醇丙酮酸（Phosphoenolpyruvate,PEP）轉(zhuǎn)變?yōu)楸幔╬yruvate）的限速酶-丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK）。在人成纖維細(xì)胞細(xì)胞（human fiberblast,HFF）中有兩種丙酮酸激酶亞型—PKM1和PKM2,由PKM基因進(jìn)行不同剪切而成,其中以PKM2為主。丙酮酸激酶（M1和M2）缺失會(huì)引起人成纖維細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞衰老,造成細(xì)胞增殖受阻,SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞比例升高,G2/M期細(xì)胞周期阻滯,細(xì)胞呼吸作用增強(qiáng)和衰老相關(guān)分泌表型（SASP）因子表達(dá)增多等特征。敲降PKM激活DNA損傷反應(yīng)（DDR）和p53-p21通路。細(xì)胞總活性氧（total ROS）的水平?jīng)]有變化,但是線粒體活性氧（Mito ROS）在敲降PKM的HFF中... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＫＭ?ｓｈＲＮＡ成功降低ＨＦＦ中ＰＫＭ的表達(dá)??（Ａ）?ＨＦＦ?中?ＰＫＭｌ?和?ＰＫＭ２?ＲＮＡ?表達(dá)（＊＊，ｐ＜０．?０１，ｎ＝３）；??（Ｂ）?ＱＰＣＲ?檢測?ＨＦＦ?中戶Ｍ?ｓｈＲＮＡ?敲降后?ＲＮＡ?表達(dá)（＊＊，?ｐ＜０．?０１，?ｎ＝３）；??

圖１?２?ｓｈＫＮＡ沉默／兄彳／后ＨＦＦ發(fā)生細(xì)胞衰老??（Ａ）感染ｓｈＲＮＡ病毒后丨丨ＦＦ的增殖能力，即隨時(shí)間細(xì)胞數(shù)目變化（＊＊，?ｎ＝３）；??（Ｂ）對細(xì)胞ＳＡ?Ｐ?ｇａ】染色，觀察細(xì)胞衰老情況（衰老細(xì)胞呈藍(lán)色為陽性，胞未著色為陰性）并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)（＊＊，?ｐ＜〇．?０１，?ｎ＝３）；??（Ｃ）流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的代表圖（ｎ＝３）；??（Ｄ）?ｓｅａｈｏｒｓｅ檢測細(xì)胞ＯＣＲ?（有氧呼吸）和ＥＣＡＲ?（胞外酸化率，無氧呼吸）（Ｅ）衰老相關(guān)分泌表型（ＳＡＳＰｓ）中的分子ＩＩ．?１?，ＣＸＣＬ２，?Ｍ．ＭＰ３轉(zhuǎn)錄水ｐ＜０．?０１，?ｎ＝３）〇??由于ＰＫＭ２通常在胚胎形成，再生和腫瘤過程中表達(dá)，這暗示丙酮酸細(xì)胞活躍增殖有重要作用［５＇６］。ＨＦＦ感染ｓｈＲＮＡ病毒后，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的形

圖１－４線粒體氧化應(yīng)激增強(qiáng)??（Ａ）細(xì)胞總體氧化水平，左側(cè)為代表性的流式細(xì)胞術(shù)撿測圖，右側(cè)為統(tǒng)計(jì)圖（Ｎｏ??ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ，?ｐ＞０．?０５，?ｎ＝３）；??１９??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]模型動(dòng)物——秀麗隱桿線蟲研究進(jìn)展[J]. 劉恩岐,倉林讓.  動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué). 2003(10)
[2]秀麗隱桿線蟲是研究發(fā)育生物學(xué)的好材料[J]. 沈靜德.  生物學(xué)通報(bào). 1991(09)

博士論文
[1]衰老細(xì)胞的代謝表型及基于FUCCI體系的分選研究[D]. 王丹麗.浙江大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3356678