人源諾如病毒（human noroviruses,HuNoVs）是引發(fā)人類急性胃腸炎的重要病原體之一;主要流行株為GII.4基因型。生菜、牡蠣等為其主要傳播載體。由于缺乏成熟的體外培養(yǎng)模式和動(dòng)物模型,阻礙了HuNoVs的研究進(jìn)展。因此,發(fā)掘HuNoVs的受/配體成為破解該瓶頸的重要途徑。在前期研究基礎(chǔ)上,本研究在錨定蛋白編碼基因（inaQn）和HuNoV（GII.4）主要衣殼蛋白P結(jié)構(gòu)域編碼基因之間插入一段編碼凝血酶識(shí)別位點(diǎn)的核酸片段,構(gòu)建升級(jí)版“假HuNoV”。經(jīng)凝血酶處理后,大腸桿菌表面展示的P蛋白可與菌體分離,且解離的P蛋白可自動(dòng)折疊成P顆粒。ELISA結(jié)果表明:所解離的P蛋白具備識(shí)別并結(jié)合HuNoVs特異性受體——組織血型抗原（Histo-blood group antigens,HBGAs）的能力�！凹貶uNoV”與HBGAs孵育,處理后可獲得P蛋白-HBGAs復(fù)合物。ELISA結(jié)果表明:該體系可特異性捕獲A型HBGA。將升級(jí)版“假HuNoV”與生菜提取物孵育,處理后可獲得P蛋白-病毒配體的復(fù)合物。ELISA結(jié)果顯示:生菜中含有可被A、H1和Lewis a型HBGA單克隆抗體... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各型HBGAs的生物合成的流程圖

25圖 2-1 重組表達(dá)載體的酶切驗(yàn)證 of recombinant expression vectors digested bM：1 kb DNA Ladder (M1181) pET28a-inaQn-20T-P (GII.4) (Nco I & EcoR 2: pET28a-inaQn-20T-P (GII.4) (Bgl II)對(duì)重組菌進(jìn)行鑒定，驗(yàn)證體系的構(gòu)建測(cè)序驗(yàn)證。用 BLAST 對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)的 GII.4 ORF2 3’端基因與 No. K測(cè)序驗(yàn)證后，我們用 ExPASy 軟件進(jìn)氨基酸序列中間沒(méi)有表現(xiàn)出終止突變-inaQn-TB-P(GII.4)構(gòu)建成功。

可知，誘導(dǎo)后的重組菌3一P(GIL4陽(yáng)L21表達(dá)出明顯的目的條帶的(約70kDa)

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]利用冰晶核蛋白構(gòu)建細(xì)菌細(xì)胞表面展示體系及其應(yīng)用研究[D]. 李茜茜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3340722