發(fā)布時間：2021-08-13 04:36

　　多核中性粒細胞（PMN）跨越血腦屏障是細菌性腦膜炎病原發(fā)生中的一個關鍵事件�？邕^血腦屏障的遷移-PMN向中樞神經系統(tǒng)的募集是一把“雙刃劍”，它不僅是宿主防御系統(tǒng)對抗腦膜炎性細菌病原菌的關鍵環(huán)節(jié)，它也會帶來顯著的中樞神經系統(tǒng)組織損傷；后者導致災難性的神經系統(tǒng)后遺癥。盡管目前疫苗的研發(fā)可以降低細菌的感染率，但仍不能完全解除腦膜炎的危害。腦膜炎病理機制方面的研究發(fā)現(xiàn)，致病性的腦膜炎性大腸桿菌K1菌株所獨有的IbeA蛋白是一個50KDa的膜蛋白,是位于該菌染色體第98分鐘處的基因島-GimA中的一個獨特基因所編碼的；IbeA作為一侵襲因子，能夠誘導大腸桿菌侵入到腦內皮微血管細胞（BMEC）；而正是腦內皮微血管細胞組成了血腦屏障。然而，對于IbeA在PMN跨血腦屏障過程中的作用尚未見報道；本文探索了IbeA在PMN跨血腦屏障遷移中的作用。通過建立的體外與體內實驗模型，分別對ibeA缺失突變體（ZD1）、IbeA蛋白或ibeA基因回補突變體、IbeA蛋白包被的微珠、母本菌株（E44）在人BMEC和大腸桿菌性腦膜炎的小鼠模型中檢驗了它們對PMN跨內皮遷移至中樞神經系統(tǒng)的誘導能力。ibeA基因缺失突變... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 新生兒細菌性腦膜炎的研究進展
        1.1.1 病理生理學特征
        1.1.2 細菌性腦膜炎病理機制的研究進展
    1.2 多核白細胞跨內皮遷移的研究進展
        1.2.1 細胞跨內皮遷移研究的概述
        1.2.2 細胞跨內皮遷移與一些疾病的發(fā)生及發(fā)展的關系
        1.2.3 細胞跨內皮遷移的方式
        1.2.4 細胞跨內皮遷移的機制
        1.2.5 白細胞跨內皮遷移的研究進展
    1.3 中間纖維波形蛋白的結構和功能
        1.3.1 中間纖維蛋白概述
        1.3.2 波形蛋白和神經膠質酸性蛋白
        1.3.3 波形蛋白的功能和作用
    1.4 脂閥及其在腦膜炎性大腸桿菌引起的白細胞遷移中的作用
        1.4.1 脂閥概述
        1.4.2 脂筏與細菌相互作用
        1.4.3 脂筏與細菌毒素
        1.4.4 脂筏參與病毒入胞過程
    1.5 立題依據(jù)和主要研究內容
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 主要研究內容
第二章 IbeA 在腦膜炎性細菌引起的 PMN 遷移中的作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌種和細胞及主要試劑
        2.1.2 實驗器材和實驗耗材
        2.1.3 細菌培養(yǎng)
        2.1.4 細胞培養(yǎng)
        2.1.5 多核白細胞跨內皮遷移的體外實驗
        2.1.6 感受態(tài)細胞制備和電轉化
        2.1.7 His-IbeA 蛋白的表達與純化
        2.1.8 ibeA 基因在腦膜炎性大腸桿菌引起的白細胞跨越血腦屏障的體內動物實驗
        2.1.9 IbeA 包被的 beads 及大腸桿菌之間的相互作用
    2.2 結果與分析
        2.2.1 大腸桿菌 K1 菌株引起的 PMN 與 BMEC 的相互作用
        2.2.2 純化的 IbeA 蛋白引起的 PMN 與 BMEC 的相互作用
        2.2.3 IbeA 蛋白足以誘導體外的 PMN 跨腦部微血管內皮細胞遷移
        2.2.4 IbeA 蛋白誘導體內的 PMN 跨腦內皮遷移現(xiàn)象
        2.2.5 條件培養(yǎng)基對 PMN 跨內皮遷移的效應
    2.3 本章小結
第三章 波形蛋白在腦膜炎性大腸桿菌 K1 菌株引起多核白細胞跨內皮遷移中的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌種、細胞及主要試劑
        3.1.2 實驗儀器與耗材
        3.1.3 大腸桿菌菌株
        3.1.4 Western Blotting 雜交
        3.1.5 PMN 遷移體外實驗
        3.1.6 Lentivirus 慢病毒轉染人 BMECs
        3.1.7 人 BMEC 中慢病毒介導的波形蛋白過表達
        3.1.8 免疫熒光與共聚焦顯微分析
    3.2 結果與分析
        3.2.1 波形蛋白斷裂抑制了 IbeA 誘導的 PMN 跨內皮遷移
        3.2.2 BMEC 波形蛋白過量表達對 PMN 穿腦內皮遷移的效應
        3.2.3 PMN 通過 BMEC 的跨細胞遷移是由波形蛋白介導的
    3.3 本章小結
第四章 腦膜炎性大腸桿菌誘導多核白細胞跨 BMEC 遷移的路徑探索
    4.1 材料與方法
        4.1.1 菌種、細胞及主要試劑
        4.1.2 實驗儀器與耗材
        4.1.3 大腸桿菌菌株
        4.1.4 Western Blotting 雜交
        4.1.5 內皮細胞粘附分子表達的免疫印跡分析
        4.1.6 人 BMEC 中慢病毒介導的波形蛋白過表達與頭部區(qū)域缺失表達
        4.1.7 PMN 體外遷移實驗
        4.1.8 免疫熒光觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    4.2 結果與分析
        4.2.1 腦膜炎性大腸桿菌誘導內皮細胞粘附分子表達
        4.2.2 IbeA 蛋白誘導內皮細胞粘附分子表達
        4.2.3 BMEC 波形蛋白對內皮細胞上粘附分子表達的效應
        4.2.4 脂閥在 ibeA+的大腸桿菌誘導的 PMN 跨 BMEC 遷移中的作用
    4.3 本章小結
第五章 IbeA 蛋白引起白細胞遷移的功能性片段初步鑒定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌種與細胞
        5.1.2 質粒與載體
        5.1.3 工具酶及主要試劑
        5.1.4 實驗儀器與耗材
        5.1.5 原核表達載體的構建
        5.1.6 融合蛋白的誘導表達與純化
    5.2 結果與分析
        5.2.1 IbeA 蛋白的生物信息學分析
        5.2.2 PCR 目的片段擴增
        5.2.3 融合蛋白的誘導表達與純化
        5.2.4 IbeA 片段蛋白的功能鑒定
    5.3 本章小結
結論與展望
    結論
    論文創(chuàng)新之處
    展望
參考文獻
攻讀博士學位期間取得的研究成果
致謝
答辯委員會對論文的評定意見



本文編號：3339757