發(fā)布時(shí)間：2021-08-13 04:36

　　多核中性粒細(xì)胞（PMN）跨越血腦屏障是細(xì)菌性腦膜炎病原發(fā)生中的一個(gè)關(guān)鍵事件�？邕^血腦屏障的遷移-PMN向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的募集是一把“雙刃劍”，它不僅是宿主防御系統(tǒng)對(duì)抗腦膜炎性細(xì)菌病原菌的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，它也會(huì)帶來顯著的中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織損傷；后者導(dǎo)致災(zāi)難性的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。盡管目前疫苗的研發(fā)可以降低細(xì)菌的感染率，但仍不能完全解除腦膜炎的危害。腦膜炎病理機(jī)制方面的研究發(fā)現(xiàn)，致病性的腦膜炎性大腸桿菌K1菌株所獨(dú)有的IbeA蛋白是一個(gè)50KDa的膜蛋白,是位于該菌染色體第98分鐘處的基因島-GimA中的一個(gè)獨(dú)特基因所編碼的；IbeA作為一侵襲因子，能夠誘導(dǎo)大腸桿菌侵入到腦內(nèi)皮微血管細(xì)胞（BMEC）；而正是腦內(nèi)皮微血管細(xì)胞組成了血腦屏障。然而，對(duì)于IbeA在PMN跨血腦屏障過程中的作用尚未見報(bào)道；本文探索了IbeA在PMN跨血腦屏障遷移中的作用。通過建立的體外與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，分別對(duì)ibeA缺失突變體（ZD1）、IbeA蛋白或ibeA基因回補(bǔ)突變體、IbeA蛋白包被的微珠、母本菌株（E44）在人BMEC和大腸桿菌性腦膜炎的小鼠模型中檢驗(yàn)了它們對(duì)PMN跨內(nèi)皮遷移至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的誘導(dǎo)能力。ibeA基因缺失突變... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 新生兒細(xì)菌性腦膜炎的研究進(jìn)展
        1.1.1 病理生理學(xué)特征
        1.1.2 細(xì)菌性腦膜炎病理機(jī)制的研究進(jìn)展
    1.2 多核白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的研究進(jìn)展
        1.2.1 細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移研究的概述
        1.2.2 細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移與一些疾病的發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系
        1.2.3 細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的方式
        1.2.4 細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的機(jī)制
        1.2.5 白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的研究進(jìn)展
    1.3 中間纖維波形蛋白的結(jié)構(gòu)和功能
        1.3.1 中間纖維蛋白概述
        1.3.2 波形蛋白和神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白
        1.3.3 波形蛋白的功能和作用
    1.4 脂閥及其在腦膜炎性大腸桿菌引起的白細(xì)胞遷移中的作用
        1.4.1 脂閥概述
        1.4.2 脂筏與細(xì)菌相互作用
        1.4.3 脂筏與細(xì)菌毒素
        1.4.4 脂筏參與病毒入胞過程
    1.5 立題依據(jù)和主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 IbeA 在腦膜炎性細(xì)菌引起的 PMN 遷移中的作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌種和細(xì)胞及主要試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材和實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.3 細(xì)菌培養(yǎng)
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.5 多核白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移的體外實(shí)驗(yàn)
        2.1.6 感受態(tài)細(xì)胞制備和電轉(zhuǎn)化
        2.1.7 His-IbeA 蛋白的表達(dá)與純化
        2.1.8 ibeA 基因在腦膜炎性大腸桿菌引起的白細(xì)胞跨越血腦屏障的體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.1.9 IbeA 包被的 beads 及大腸桿菌之間的相互作用
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 大腸桿菌 K1 菌株引起的 PMN 與 BMEC 的相互作用
        2.2.2 純化的 IbeA 蛋白引起的 PMN 與 BMEC 的相互作用
        2.2.3 IbeA 蛋白足以誘導(dǎo)體外的 PMN 跨腦部微血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移
        2.2.4 IbeA 蛋白誘導(dǎo)體內(nèi)的 PMN 跨腦內(nèi)皮遷移現(xiàn)象
        2.2.5 條件培養(yǎng)基對(duì) PMN 跨內(nèi)皮遷移的效應(yīng)
    2.3 本章小結(jié)
第三章 波形蛋白在腦膜炎性大腸桿菌 K1 菌株引起多核白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移中的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌種、細(xì)胞及主要試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        3.1.3 大腸桿菌菌株
        3.1.4 Western Blotting 雜交
        3.1.5 PMN 遷移體外實(shí)驗(yàn)
        3.1.6 Lentivirus 慢病毒轉(zhuǎn)染人 BMECs
        3.1.7 人 BMEC 中慢病毒介導(dǎo)的波形蛋白過表達(dá)
        3.1.8 免疫熒光與共聚焦顯微分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 波形蛋白斷裂抑制了 IbeA 誘導(dǎo)的 PMN 跨內(nèi)皮遷移
        3.2.2 BMEC 波形蛋白過量表達(dá)對(duì) PMN 穿腦內(nèi)皮遷移的效應(yīng)
        3.2.3 PMN 通過 BMEC 的跨細(xì)胞遷移是由波形蛋白介導(dǎo)的
    3.3 本章小結(jié)
第四章 腦膜炎性大腸桿菌誘導(dǎo)多核白細(xì)胞跨 BMEC 遷移的路徑探索
    4.1 材料與方法
        4.1.1 菌種、細(xì)胞及主要試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        4.1.3 大腸桿菌菌株
        4.1.4 Western Blotting 雜交
        4.1.5 內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)的免疫印跡分析
        4.1.6 人 BMEC 中慢病毒介導(dǎo)的波形蛋白過表達(dá)與頭部區(qū)域缺失表達(dá)
        4.1.7 PMN 體外遷移實(shí)驗(yàn)
        4.1.8 免疫熒光觀察與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 腦膜炎性大腸桿菌誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)
        4.2.2 IbeA 蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)
        4.2.3 BMEC 波形蛋白對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞上粘附分子表達(dá)的效應(yīng)
        4.2.4 脂閥在 ibeA+的大腸桿菌誘導(dǎo)的 PMN 跨 BMEC 遷移中的作用
    4.3 本章小結(jié)
第五章 IbeA 蛋白引起白細(xì)胞遷移的功能性片段初步鑒定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌種與細(xì)胞
        5.1.2 質(zhì)粒與載體
        5.1.3 工具酶及主要試劑
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        5.1.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.1.6 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 IbeA 蛋白的生物信息學(xué)分析
        5.2.2 PCR 目的片段擴(kuò)增
        5.2.3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
        5.2.4 IbeA 片段蛋白的功能鑒定
    5.3 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    論文創(chuàng)新之處
    展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
答辯委員會(huì)對(duì)論文的評(píng)定意見



本文編號(hào)：3339757