目的探討氯化鋰（Li Cl）激活Wnt/β-catenin信號通路致小鼠Sca-1+造血干/祖細胞（Sca-1+HSC/HPC）衰老及其機制。方法免疫磁珠法分離純化小鼠Sca-1+HSC/HPC。純化后細胞分為:正常對照組,常規(guī)培養(yǎng);Li Cl組,正常對照組基礎上,加入Li Cl（終濃度10mmol/L）;D-半乳糖致衰組,正常對照組基礎上,加入D-半乳糖（終濃度166mmol/L）,各組培養(yǎng)48h。造血祖細胞混合集落（CFU-Mix）培養(yǎng)檢測Sca-1+HSC/HPC多向分化潛能,細胞計數(shù)試劑盒-8（CCK-8）檢測Sca-1+HSC/HPC增殖能力,衰老相關β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色檢測細胞衰老,免疫細胞化學染色和Western blotting檢測細胞內(nèi)β-catenin、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、P53、P21蛋白表達,ELISA檢測細胞胞質(zhì)內(nèi)8羥基脫氧鳥苷（8-OH-d G）含量。結果與正常對照組相比,Li Cl組與D-半乳糖致衰組Sca-1+HSC/HPC增殖能力下降,形成CFU-Mix數(shù)量下降,SA-β-Gal染色陽性細胞百分率增加,β-catenin... 

【文章來源】：解剖學報. 2016,47(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1. 實驗動物
    2. 主要試劑
    3. Sca-1+HSC / HPC分離純化、鑒定
    4. CCK-8 檢測Li Cl對Sca-1+HSC / HPC增殖能力的影響
    5. 多向造血祖細胞集落( CFU-Mix) 培養(yǎng)檢測Li Cl對Sca-1+HSC / HPC分化能力的影響
    6. 衰老相關-β-半乳糖苷酶染色檢測Li Cl對Sca-1+HSC / HPC衰老的影響
    7.激光掃描共焦顯微鏡檢測細胞P53與β-catenin蛋白表達及定位
    8. Western blotting檢測P53、P21、β-catenin及GSK-3β 蛋白表達
    9. ELISA檢測上清液中8-OH-d G濃度水平
    10. 統(tǒng)計學分析
結果
    1. Sca-1+HSC / HPC分離純化及鑒定
    2. 不同濃度Li Cl對Sca-1+HSC / HPC形成CFUMix的影響
    3. Li Cl對Sca-1+HSC / HPC增殖能力影響
    4. Li Cl對Sca-1+HSC / HPC的SA-β-Gal染色陽性百分率影響
    5. Li Cl對Sca-1+HSC / HPC表達P53 與 β-catenin蛋白及定位的影響
    6. Li Cl對小鼠Sca-1+HSC / HPC表達P53、P21、β-catenin、GSK-3β 蛋白的影響
    7.Li Cl對小鼠Sca-1+HSC/HPC 8-OH-d G水平的影響
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]免疫磁性活化細胞分選方法優(yōu)化及純化后細胞的生物學特性檢測[J]. 耿珊,張琛,劉俊,劉典鋒,周玥,王亞平.  細胞與分子免疫學雜志. 2012(07)
[2]Wnt/β-catenin信號通路對間充質(zhì)干細胞衰老的影響及其作用機制[J]. 項曉霞,陳律,王駿浩,張余斌,張大勇.  浙江大學學報(醫(yī)學版). 2011(06)



本文編號：3327962