我國流行弓形蟲蟲株微衛(wèi)星基因分型及致密顆粒蛋白3介導(dǎo)的細胞凋亡研究
發(fā)布時間:2021-07-20 23:48
背景:剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii,T.gondii)是一種全球廣泛傳播、可以感染幾乎所有溫血動物的胞內(nèi)寄生原蟲。弓形蟲感染引起的弓形蟲病可以使人及感染動物具有不同臨床表現(xiàn)。各地域來源及不同毒力弓形蟲株的生物學特性具有顯著的差異;谙拗菩云伍L度多態(tài)性(RFLP)方法進行的弓形蟲分子流行病學調(diào)查顯示,北美及歐洲來源的弓形蟲蟲株主要屬于三個不同的基因型,即Type I,II和III型(亦稱原型克隆譜系(archetypal clonal lineages)。然而隨著研究的深入,大量有別于以上三類主要基因型的非典型基因型相繼在世界其他地區(qū)被鑒定。國內(nèi)對分離自中國不同地區(qū)的動物源及人源弓形蟲研究發(fā)現(xiàn),流行于中國弓形蟲蟲株基因型與北美、歐洲、非洲等地的原型譜系不同,亦有別于南美的大量非典型基因型。根據(jù)RFLP-PCR分型的結(jié)果并參照Toxo DB數(shù)據(jù)庫對弓形蟲基因型的命名,我國流行的弓形蟲主要為Toxo DB#9型,認為該型是流行于中國的剛地弓形蟲優(yōu)勢基因型,稱為Chinese 1型。由于基因組中存在微衛(wèi)星現(xiàn)象(即短串聯(lián)重復(fù)序列),且微衛(wèi)星具有高度遺傳多態(tài)性及高頻率突變的特...
【文章來源】:安徽醫(yī)科大學安徽省
【文章頁數(shù)】:108 頁
【學位級別】:博士
【文章目錄】:
英文縮略詞對照表(Abbreviation)
1.中文摘要
2.英文摘要
3 前言
4 第一部分 我國流行弓形蟲株微衛(wèi)星基因分型及種群進化分析
4.1. 材料與方法
4.1.1. 弓形蟲蟲株來源
4.1.2. 實驗動物
4.1.3. 細胞株
4.1.4. 主要試劑
4.1.5. 主要儀器設(shè)備
4.1.6. 實驗方法
4.1.7. 弓形蟲微衛(wèi)星基因分型結(jié)果
4.1.8. 弓形蟲頂復(fù)體基因組及核基因組內(nèi)含子11個保守序列擴增結(jié)果
4.1.9. 我國流行弓形蟲株種群遺傳進化分析
4.1.10. 我國流行弓形蟲株小鼠毒力試驗結(jié)果
4.1.11. 弓形蟲株細胞培養(yǎng)毒力試驗
4.2. 討論
5. 第二部分 Chinese1型弓形蟲致密顆粒蛋白3介導(dǎo)宿主細胞凋亡研究
5.1. 材料與方法
5.1.1. 質(zhì)粒、菌株及細胞株
5.1.2. 主要試劑
5.1.3. 主要儀器設(shè)備
5.1.4. 實驗方法
5.2. 結(jié)果
5.2.1. Chinese1型Wh6成囊株GRA3基因擴增
5.2.2. 真核表達載體pEGFP-GRA3/ pFlag-GRA3構(gòu)建及鑒定
5.2.3. 重組真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 293T細胞檢測
5.2.4. 真核細胞凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平PCR芯片分析結(jié)果
5.2.5. 轉(zhuǎn)染細胞凋亡相關(guān)分子轉(zhuǎn)錄水平的熒光定量 PCR 檢測結(jié)果
5.2.6. 轉(zhuǎn)染細胞凋亡相關(guān)標記物 Western blotting 檢測
5.2.7. 轉(zhuǎn)染細胞Annex V FITC/PI流式凋亡檢測結(jié)果
5.3. 討論
6. 結(jié)論
7. 參考文獻
8. 附錄
8.1. 個人簡歷
8.2. 在學期間的研究成果
8.3. 博士研究生期間參與的科研項目
9. 致謝
10. 綜述及參考文獻
參考文獻
本文編號:3293856
【文章來源】:安徽醫(yī)科大學安徽省
【文章頁數(shù)】:108 頁
【學位級別】:博士
【文章目錄】:
英文縮略詞對照表(Abbreviation)
1.中文摘要
2.英文摘要
3 前言
4 第一部分 我國流行弓形蟲株微衛(wèi)星基因分型及種群進化分析
4.1. 材料與方法
4.1.1. 弓形蟲蟲株來源
4.1.2. 實驗動物
4.1.3. 細胞株
4.1.4. 主要試劑
4.1.5. 主要儀器設(shè)備
4.1.6. 實驗方法
4.1.7. 弓形蟲微衛(wèi)星基因分型結(jié)果
4.1.8. 弓形蟲頂復(fù)體基因組及核基因組內(nèi)含子11個保守序列擴增結(jié)果
4.1.9. 我國流行弓形蟲株種群遺傳進化分析
4.1.10. 我國流行弓形蟲株小鼠毒力試驗結(jié)果
4.1.11. 弓形蟲株細胞培養(yǎng)毒力試驗
4.2. 討論
5. 第二部分 Chinese1型弓形蟲致密顆粒蛋白3介導(dǎo)宿主細胞凋亡研究
5.1. 材料與方法
5.1.1. 質(zhì)粒、菌株及細胞株
5.1.2. 主要試劑
5.1.3. 主要儀器設(shè)備
5.1.4. 實驗方法
5.2. 結(jié)果
5.2.1. Chinese1型Wh6成囊株GRA3基因擴增
5.2.2. 真核表達載體pEGFP-GRA3/ pFlag-GRA3構(gòu)建及鑒定
5.2.3. 重組真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 293T細胞檢測
5.2.4. 真核細胞凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平PCR芯片分析結(jié)果
5.2.5. 轉(zhuǎn)染細胞凋亡相關(guān)分子轉(zhuǎn)錄水平的熒光定量 PCR 檢測結(jié)果
5.2.6. 轉(zhuǎn)染細胞凋亡相關(guān)標記物 Western blotting 檢測
5.2.7. 轉(zhuǎn)染細胞Annex V FITC/PI流式凋亡檢測結(jié)果
5.3. 討論
6. 結(jié)論
7. 參考文獻
8. 附錄
8.1. 個人簡歷
8.2. 在學期間的研究成果
8.3. 博士研究生期間參與的科研項目
9. 致謝
10. 綜述及參考文獻
參考文獻
本文編號:3293856
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