目的:分別用原核和真核細胞穩(wěn)定表達水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（glycoprotein E,g E）的基因胞外域,對融合蛋白進行特異性鑒定和免疫反應性分析,將這兩種融合蛋白分別免疫新西蘭家兔,制備兔抗VZV g E多克隆抗體;應用融合蛋白作為抗原建立檢測VZV特異性抗體的血清學試驗,開展對VZV感染的流行病學調(diào)查,以評價VZV疫苗的免疫效果,為易感人群VZV感染的診斷和治療以及水痘預防措施的制定提供重要的實驗依據(jù),并為研制安全性更高的VZV g E亞單位疫苗奠定基礎(chǔ)。方法:從臨床采集帶狀皰疹患者的皮膚囊泡液接種至單層人胚胎成纖維細胞（human embryo fibroblast,HF）,進行病毒分離;對分離的病毒株進行特征性細胞病變效應（Cytopathic effect,CPE）,間接免疫熒光和DNA測序鑒定。將確認的VZV臨床分離株體外培養(yǎng),PCR擴增VZV g E基因胞外域片段,分別構(gòu)建原核表達質(zhì)粒g E-p ET-32a（+）和真核表達質(zhì)粒g E-p CDNA3.1/myc-His（-）,測序后將原核質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.col... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

HZ患者皮膚囊泡液接種至HF細胞后出現(xiàn)CPE結(jié)果(×200).A：正常HF細胞；B：VZV感

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文原核重組質(zhì)粒 gE-pET-32a(+)和真核重組質(zhì)粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-鑒定PCR 擴增的 gE 基因的產(chǎn)物和重組質(zhì)粒 gE-pET-32a(+)被雙酶切后的產(chǎn)物凝膠電泳，均可見 1617 bp 的目的條帶。圖 3、4。該產(chǎn)物經(jīng) DNA 測序后T 法與 GenBank 數(shù)據(jù)庫比對，其序列與 VZV Dumas 標準株基因組 DNA 的應序列符合率為 100%。圖 5。

重組質(zhì)粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-)的構(gòu)建與酶切鑒定. A：gE 基因胞外域重組質(zhì)粒單、雙酶切鑒定。 M：Marker；1: 目的基因片段；2: 以 ddH2O照；3: 重組質(zhì)粒；4: 重組質(zhì)粒經(jīng) Xhol I 酶切；5: 重組質(zhì)粒經(jīng) HandIII 酶雙酶切。e construction of the gE-pCDNA3.1/myc-His(-) plasmid. A: PCR amplificalar domain; B: Identification of recombinant plasmid with restriction enzymerker; 1:gE extracellular domain gene product; 2: PCR negative cA3.1/myc-His(-) plasmid; 4: Xhol I enzyme digestion; 5: HandIII enzymeand HandIII double enzyme digestion.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]水痘-帶狀皰疹病毒疫苗的評價與研究進展[J]. 伊興旭,甘霖,陳敬賢,王明麗.  微生物與感染. 2014(04)
[2]應用膜抗原熒光抗體試驗檢測人群水痘-帶狀皰疹病毒血清抗體陽性率[J]. 劉靜靜,王明麗,甘霖,廖偉嬌,陳敬賢.  中華流行病學雜志. 2009 (04)
[3]水痘-帶狀皰疹病毒臨床分離株基因型別分析以及與Oka疫苗株的區(qū)別[J]. 劉靜靜,王明麗,甘霖,楊森,陳敬賢.  中華微生物學和免疫學雜志. 2009 (03)
[4]水痘減毒活疫苗的研究進展[J]. 甘霖,王明麗,陳敬賢.  微生物與感染. 2009(01)
[5]水痘-帶狀皰疹免疫球蛋白研究進展[J]. 王敏力,沈琦.  中國生物制品學雜志. 2007(09)



本文編號：3292008