研究背景和目的:結(jié)腸癌是消化道常見的惡性腫瘤,大約50%結(jié)腸癌發(fā)生與Ras基因突變有關(guān)。大量研究表明Ras-MEK1/2-ERK1/2信號(hào)途徑在多種腫瘤（包括結(jié)腸癌）的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中處于異�；罨癄顟B(tài)。維甲酸（retinoi acid）屬于維生素A類化合物家族,因?yàn)轸然较虿煌譃閮煞N異構(gòu)體,即全反式維甲酸（ATRA）和順式維甲酸。ATRA能夠誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞分化或抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。故而本次實(shí)驗(yàn)旨在探討全反式維甲酸（ATRA）是否通過作用ERK1/2信號(hào)通路抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及可能的分子機(jī)制。方法:MTT法檢測(cè)示ATRA能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖,RT-PCR及Western Blot法檢測(cè)經(jīng)ATRA處理的結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞中MEK1/2-ERK1/2的表達(dá)水平。流式細(xì)胞儀測(cè)定LS174T細(xì)胞經(jīng)ATRA與PD98059（MEK1/2的特異性抑制劑）聯(lián)合處理后的凋亡水平。結(jié)果:MTT法檢測(cè)示ATRA抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖;RT-PCR及Western Blot法示ATRA能提高LS174T細(xì)胞中ERK2 mRNA水平,增強(qiáng)MEK/ERK蛋白表達(dá),促進(jìn)ERK磷酸化。PD98059與A... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞的生長曲線

圖2 A)LS174T細(xì)胞的ERK2的RT-PCR結(jié)果。B)根據(jù)Volume ERK2/Vβ-actin 的比值制作出的柱形圖。1組：無血清培養(yǎng)基對(duì)照組；2組：10-5mol/LATRA+無血清培養(yǎng)基3組：含10 %胎牛血清（FBS）培養(yǎng)液對(duì)照組；4組：10-5mol/LAT含10 %FBS培養(yǎng)液刺激組。表 3 RT-PCR 結(jié)果 ERK2/ACTIN 比值（ ）Group 2天 4天 1組 0.716±0.0315 0.8136±0.0236 02組 0.8386±0.0373 0.9448±0.0294 03組 0.9006±0.0448 1.8358±0.0322 14組 0.9264±0.0159 1.9434±0.0163 1

mol/LATRA后，加藥組與相應(yīng)對(duì)照組相比，MEK 1/2、p-MEK1/2、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白活化趨勢(shì)一致，且略有升高（圖3A）。為排除胎牛血清對(duì)細(xì)胞p-ERK表達(dá)的影響，我們?cè)谌狈ρ宓腞PIM1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞，并同時(shí)加入藥物ATRA。MEK 1/2、p-MEK1/2、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白在表達(dá)量上，ATRA處理組明顯高于相應(yīng)不加藥處理組（圖3B）。圖3 ATRA提高結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞MEK/ERK蛋白表達(dá)，促進(jìn)ERK磷酸化。A) 在含10%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基中，LS174T細(xì)胞在ATRA刺激下，MEK/ERK、P-ERK1/2蛋白表達(dá)均略比正常對(duì)照組高。B）在無血清的RPMI培養(yǎng)基中，ATRA刺激結(jié)腸癌細(xì)胞MEK/ERK 蛋白表達(dá)


本文編號(hào)：3280997