本文關(guān)鍵詞：抑制RhoC對SKOV3在裸鼠動物模型生長的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的： 卵巢癌是女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴重危害廣大女性同胞的健康。目前，臨床常用治療手段主要是利用手術(shù)的方式減滅惡性腫瘤細胞，并聯(lián)合放、化療等治療手段。盡管有著豐富的臨床經(jīng)驗為基礎(chǔ)，部分卵巢癌患者的病情得到了一定的緩解，但是卵巢惡性腫瘤的早期診斷，聯(lián)合治療的效果，以及治療后的復(fù)發(fā)率和5年存活率都不如人意�，F(xiàn)下，基因治療已經(jīng)成為探索惡性腫瘤治療手段的新領(lǐng)域。RhoC基因作為Rho（Ras-homologous,Ras同源物）亞家族蛋白中的一員，在卵巢惡性腫瘤中存在著過高表達的情況，已經(jīng)被廣大專家學者所認識。大量的研究亦證實了RhoC基因在卵巢惡性腫瘤中的高表達與惡性腫瘤的侵襲能力呈正相關(guān)。我們在前期的體外實驗中也發(fā)現(xiàn)了RhoC基因在卵巢惡性腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展過程中有著極其重要的作用。我們通過構(gòu)建RhoC-miRNA沉默的真核表達載體成功的轉(zhuǎn)染了SKOV3細胞，發(fā)現(xiàn)被轉(zhuǎn)染的細胞其生長速度顯著減慢，而細胞凋亡的情況卻顯著增加，進一步表明了RhoC基因在體外細胞層面上具有癌基因的性能。為做進一步探討RhoC基因被沉默后在體內(nèi)的作用情況，，本實驗應(yīng)用構(gòu)建好的RhoC基因DNA干擾的慢病毒載體，成功轉(zhuǎn)染SKOV3細胞，在荷瘤鼠體內(nèi)進行注射，觀察其作用，探討特異性抑制RhoC基因表達對卵巢癌動物模型的影響，以期為卵巢癌基因治療新方法提供科學依據(jù)。 材料與方法： 選取雌性BALB/c裸小鼠,6～8周齡,體重18～22ｇ進行飼養(yǎng)。將包裝好的Lenti-shRhoC和Lenti-NC慢病毒載體委托吉林大學公共衛(wèi)生學院衛(wèi)生毒理學重點實驗室制備成病毒液并轉(zhuǎn)染到對數(shù)生長期的SKOV3細胞中。將BALB/c裸小鼠隨機分成3組,分別為未被轉(zhuǎn)染病毒液的空白對照組、轉(zhuǎn)染了Lenti-NC病毒液的陰性對照組和轉(zhuǎn)染了Lenti-shRhoC病毒液的實驗組(即Lenti-shRhoC組),每組10只。分組別于皮下注射0.2m（l5×106/ml）的SKOV3、Lenti-NC、Lenti-shRhoC細胞液。每隔2天觀察并記錄裸小鼠的成瘤情況，對小鼠稱重、測量并計算腫瘤體積，繪制生長曲線。于接種后第20日處死裸小鼠，觀察腫瘤組織的大體變化。制備石蠟切片行HE染色，觀察腫瘤細胞的形態(tài)學變化。Westernblot法檢測RhoC-miRNA慢病毒注射后皮下移植瘤組織的蛋白表達情況。 結(jié)果： 1.三組裸小鼠皮下種植瘤質(zhì)量與體積變化 注射20ｄ后處死裸小鼠,實驗組（即Lenti-shRhoC組）的移植瘤成瘤率、瘤體質(zhì)量、瘤體體積全部明顯低于陰性對照組（即Lenti-NC組）和空白對照組（即SKOV3組），P＜0.01，具有統(tǒng)計學意義。而陰性對照組與空白對照組比較無統(tǒng)計學差異，P＞0.05。 2. Western blotting檢測裸小鼠皮下種植瘤中RhoC蛋白的表達情況。 Western-blot法檢測結(jié)果明確顯示,實驗組、陰性對照組與空白對照組相對應(yīng)的RhoC蛋白值分別為0.3865±0.0328、0.4728±0.0257、0.0964±0.0164,結(jié)果說明,實驗組能顯著抑制皮下移植瘤組織中RhoC蛋白的表達。 3.人卵巢癌細胞裸小鼠皮下種植瘤的病理學觀察 將剝離下的腫瘤組織中間剖開,肉眼可見空白對照組及陰性對照組的人卵巢瘤細胞裸小鼠移植瘤的腫瘤組織均呈駝峰狀或葉狀生長,質(zhì)地稍硬,切面呈灰白色。經(jīng)過HE染色后,在顯微鏡下可見人卵巢癌細胞皮下種植瘤的細胞形狀大小不一,核大深染,核異型及病理分裂像明顯,確定該組織為惡性腫瘤組織。 結(jié)論： 利用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)特異性抑制RhoC基因在卵巢癌裸小鼠模型中的體內(nèi)研究表明了：RhoC-miRNA慢病毒注射對荷人卵巢癌裸小鼠皮下移植瘤具有使腫瘤體積縮小、侵襲能力下降的作用；RhoC-miRNA可以有效抑制RhoC基因蛋白表達水平。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒 RNAi 卵巢癌 RhoC基因
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R-332;R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-16
• 第2章 材料與方法16-20
• 2.1 實驗動物與主要試劑16
• 2.2 卵巢癌細胞株 SKOV3 的培養(yǎng)16
• 2.3 重組慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染16-17
• 2.4 荷人卵巢癌鼠皮下種植瘤的建立及致瘤能力的觀察17
• 2.4.1 BALB/c 裸小鼠的分組17
• 2.4.2 荷瘤鼠的制備17
• 2.5 測量腫瘤體積及制備標本17-18
• 2.6 Westernblot 法檢測 RhoC-miRNA 慢病毒注射后皮下種植瘤組織的內(nèi) RhoC 蛋白的表達18
• 2.7 HE 染色18-19
• 2.8 統(tǒng)計學處理19-20
• 第3章 實驗結(jié)果20-24
• 3.1 各組小鼠皮下種植瘤質(zhì)量與體積變化20-22
• 3.2 Western blotting（免疫蛋白印跡技術(shù)）檢測人卵巢癌細胞裸小鼠皮下種植瘤中 RhoC 蛋白的表達結(jié)果22-23
• 3.3 人卵巢癌細胞裸小鼠皮下種植瘤的病理學觀察23-24
• 第4章 討論24-28
• 第5章 結(jié)論28-29
• 引用文獻29-32
• 綜述32-46
• 參考文獻42-46
• 作者簡介46-47
• 致謝47

【參考文獻】

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1 姜洋;肖尊安;李俊全;;RNA干擾降低煙草植株中內(nèi)源生長素水平[J];北京師范大學學報(自然科學版);2006年04期

  本文關(guān)鍵詞：抑制RhoC對SKOV3在裸鼠動物模型生長的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326190