CCT-ODN對配體誘導(dǎo)的TLR7/9細胞內(nèi)移行的抑制作用及可能機理
發(fā)布時間：2021-07-03 00:12
Toll樣受體（Toll-like receptor，TLRs）是固有免疫系統(tǒng)中能識別病原體相關(guān)分子模式的模式識別受體（PRR）之一，在識別病原微生物高度保守的結(jié)構(gòu)分子中起到很關(guān)鍵的作用。每種TLRs能識別不同的微生物分子，其中能識別核酸的包括：TLR3，7，8和9，而且自身核酸也保留了活化TLRs信號的能力。當(dāng)免疫細胞接受到不當(dāng)刺激時，會引發(fā)自身免疫性疾病。當(dāng)細胞處于穩(wěn)定狀態(tài)時，大多數(shù)TLR7/9表達在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，當(dāng)細胞受到病毒侵襲時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的多跨膜蛋白Unc93B1負責(zé)將TLR7/9從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)移到內(nèi)體中，在內(nèi)體中分裂成有活性的受體，與配體結(jié)合，啟動下游信號通路。CCT-ODN是一種模擬人類微衛(wèi)星DNA的含有8個CCT重復(fù)單位的脫氧寡核苷酸（ODN），前期工作表明：該ODN是一種抑制性O(shè)DN，對TLRs的抑制作用具有選擇性，表現(xiàn)為不抑制TLR3和TLR4的活性，對TLR9的抑制能力強于TLR7，然而，CCT-ODN是如何抑制TLR7/9的活性尚不清楚。有文獻報道：位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的多跨膜蛋白Unc93B1對TLR7和TLR9的運輸具有選擇性，野生型的Unc93B1優(yōu)先運輸TLR9，而D3...
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：147 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
不同濃度的B型CpGODN（CpG2006）和/或CCT-ODN對小鼠脾細胞中TLR9胞內(nèi)運輸?shù)挠绊?br>
B，C 三種型別的 CpG ODN 對 TLR9 細胞內(nèi)移行的影響Fig 1.2 Effect of A, B and C type CpG ODN on the intracellular trafficking ofTLR9 in CAL-1 cellsCAL-1 cells were cultured in DMEM/10% FBS containing 2μg/ml A-, B-,C-type CpG ODN (CpG2216, CpG2006, C274), 8μg/ml CCT-ODN andCpG2006+CCT-ODN (2μg/ml+8μg/ml) for 2 hours and then fixed on slides. Theslides were stained with polyclonal antibodies against Calnexin, an ER-specificprotein, or TLR9 followed by secondary antibodies labeled with Alexa Fluor-488(green color, for Calnexin) or Alexa Fluor-555 (red color, for TLR9), and thendetected under the confocal microscope (1800 )（4）通過 TLR9 配體劑量來確定該實驗中 CCT-ODN 作用于 CAL-1 細胞的時效和量效參數(shù)。在研究中需要選擇合適劑量的刺激劑和 CCT-ODN，在研究CCT-ODN 對 TLR7/9 運輸?shù)挠绊憰r，需要確定其合適用量。小鼠脾細胞是一種
第二篇 研究內(nèi)容恰當(dāng)?shù)拇碳﹦┝�，該劑量須滿足的條件是：1）具備誘導(dǎo) TLR9 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中運出的能力；2）刺激能力不能過大，以免掩蓋抑制劑的原本能力。嘗試刺激劑劑量相對較小時，具體情況如何？首先選擇 1 μg/ml，從結(jié)果中可以看出 CpG2006的劑量為 1μg/ml 時，足以誘導(dǎo) TLR9 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中運出，為避免刺激劑對 TLR9的誘導(dǎo)能力過強，致使 CCT-ODN 無法抑制強度過大的刺激劑誘導(dǎo)的移行。綜合考慮選擇刺激劑劑量為 1μg/ml，之前的研究表明：當(dāng)抑制劑 CCT-ODN 的劑量為8μg/ml 時，抑制能力最強，CCT-ODN 也是一種 ODN，劑量太大可能會起到刺激劑的作用，嘗試選擇相對劑量較小的 6μg/ml，發(fā)現(xiàn) 6μg/ml 也有抑制能力。但為保證研究平臺穩(wěn)定，選擇 CpG2006 劑量為 1μg/ml，CCT-ODN 劑量為 8μg/ml（見圖 1.3）。
本文編號：3261458
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：147 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
不同濃度的B型CpGODN（CpG2006）和/或CCT-ODN對小鼠脾細胞中TLR9胞內(nèi)運輸?shù)挠绊?br>
B，C 三種型別的 CpG ODN 對 TLR9 細胞內(nèi)移行的影響Fig 1.2 Effect of A, B and C type CpG ODN on the intracellular trafficking ofTLR9 in CAL-1 cellsCAL-1 cells were cultured in DMEM/10% FBS containing 2μg/ml A-, B-,C-type CpG ODN (CpG2216, CpG2006, C274), 8μg/ml CCT-ODN andCpG2006+CCT-ODN (2μg/ml+8μg/ml) for 2 hours and then fixed on slides. Theslides were stained with polyclonal antibodies against Calnexin, an ER-specificprotein, or TLR9 followed by secondary antibodies labeled with Alexa Fluor-488(green color, for Calnexin) or Alexa Fluor-555 (red color, for TLR9), and thendetected under the confocal microscope (1800 )（4）通過 TLR9 配體劑量來確定該實驗中 CCT-ODN 作用于 CAL-1 細胞的時效和量效參數(shù)。在研究中需要選擇合適劑量的刺激劑和 CCT-ODN，在研究CCT-ODN 對 TLR7/9 運輸?shù)挠绊憰r，需要確定其合適用量。小鼠脾細胞是一種
第二篇 研究內(nèi)容恰當(dāng)?shù)拇碳﹦┝�，該劑量須滿足的條件是：1）具備誘導(dǎo) TLR9 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中運出的能力；2）刺激能力不能過大，以免掩蓋抑制劑的原本能力。嘗試刺激劑劑量相對較小時，具體情況如何？首先選擇 1 μg/ml，從結(jié)果中可以看出 CpG2006的劑量為 1μg/ml 時，足以誘導(dǎo) TLR9 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中運出，為避免刺激劑對 TLR9的誘導(dǎo)能力過強，致使 CCT-ODN 無法抑制強度過大的刺激劑誘導(dǎo)的移行。綜合考慮選擇刺激劑劑量為 1μg/ml，之前的研究表明：當(dāng)抑制劑 CCT-ODN 的劑量為8μg/ml 時，抑制能力最強，CCT-ODN 也是一種 ODN，劑量太大可能會起到刺激劑的作用，嘗試選擇相對劑量較小的 6μg/ml，發(fā)現(xiàn) 6μg/ml 也有抑制能力。但為保證研究平臺穩(wěn)定，選擇 CpG2006 劑量為 1μg/ml，CCT-ODN 劑量為 8μg/ml（見圖 1.3）。
本文編號：3261458
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