目的觀察髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白139-151(proteolipid protein,PLP_139-151)誘導SJL小鼠構建的復發(fā)緩解型的實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型復發(fā)期腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞的病理改變。方法應用100μg、150μg PLP_139-151多肽片段免疫SJL小鼠構建復發(fā)緩解型EAE模型（分別簡稱為100μg PLP組、150μg PLP組）,另設健康對照組（對照組;采用與實驗組等體積溶媒處理）,觀察35 d。觀察兩組EAE小鼠的發(fā)病情況及神經(jīng)功能殘疾進展評分差異,選擇發(fā)病快、神經(jīng)功能殘疾進展評分高者（計為EAE組）觀察復發(fā)期小膠質(zhì)細胞活化情況。EAE組于復發(fā)期疾病高峰時,對照組于相同時間點,取小鼠大腦皮層組織,應用免疫組織化學（immunohistochemical,IHC）染色及免疫熒光（immunofluorescence,IF）染色比較兩組小膠質(zhì)細胞的活化情況。結果 150μg PLP組小鼠在兩個發(fā)病高峰（分別為免疫第13、28天）均早于... 

【文章來源】：中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志. 2019,26(06)北大核心

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【部分圖文】：

三組小鼠神經(jīng)功能評分比較

動物模型為人類深入了解疾病發(fā)病機制及研發(fā)治療藥物提供了保障,MS實驗動物模型有多種,包括病毒模型、化學毒素模型、EAE模型等。EAE模型是最常用的擬MS實驗動物模型,能夠較好模擬MS的臨床表現(xiàn)、病理特征。目前常用的免疫原為髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)[7]、PLP、髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoptein,MOG)等[8]。但無論是MBP或MOG多肽片段誘發(fā)的動物模型均以急性發(fā)作為主,急性期維持時間短且多為單相病程。由于在MS患者中,約80%～85%為復發(fā)緩解型,PLP誘發(fā)的動物模型具有維持時間長、復發(fā)緩解等特點,與臨床MS的復發(fā)緩解病程更相似,能更好的模擬疾病狀態(tài)。而既往針PLP誘導的EAE動物模型的研究,也多集中在第一次發(fā)病期,針對其復發(fā)期的研究鮮有報道。由于在MS患者中,約80%～85%為復發(fā)緩解型,因此針對疾病復發(fā)期的研究同樣至關重要,本實驗應用針對EAE研究的出現(xiàn)頻率較高的兩個劑量150 μg 和100 μg PLP139-151成功誘導SJL小鼠發(fā)病建立EAE模型,并且成功觀察到疾病緩解復發(fā)的模擬臨床過程。研究結果顯示,150 μg PLP組小鼠在每個發(fā)病高峰均早于100 μg PLP組,且神經(jīng)功能評分高于或等于100 μg PLP組。 為了深入研究疾病復發(fā)期時EAE小鼠較對照組小鼠的小膠質(zhì)細胞的病理差異,本研究進一步觀察了150 μg PLP139-151誘導的EAE模型緩解后二次復發(fā)時小膠質(zhì)細胞的活化情況。圖3 EAE模型組和對照組小鼠大腦皮層小膠質(zhì)細胞（Iba-1標記）表達（IF×200)

圖 2 EAE組和對照組小鼠大腦皮層Iba-1小膠質(zhì)細胞(標記)表達(IHC×200)。小膠質(zhì)細胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)的免疫監(jiān)視細胞,相當于CNS內(nèi)的巨噬細胞,是維持CNS免疫平衡的一道最主要防線。正常情況下,小膠質(zhì)細胞處于靜息態(tài),當機體受到體內(nèi)外異物侵襲時,小膠質(zhì)細胞一方面迅速活化,釋放大量的炎性因子、趨化因子、補體等,通過抗原呈遞、吞噬、細胞/體液免疫等過程,及時清除異物的侵襲或者清理機體內(nèi)死亡的細胞、碎屑等[9-11]。近年來研究發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細胞幾乎參與了所有中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性病變及退行性疾病,如阿爾茲海默病、帕金森病、多發(fā)性硬化等[12-13],本研究觀察到在PLP誘導的復發(fā)緩解型EAE小鼠在疾病復發(fā)期腦組織中存在著Iba-1+細胞的表達明顯增多的現(xiàn)象,并且同時伴隨小膠質(zhì)細胞體積增大,突起增多等相關的形態(tài)改變,提示EAE模型中可能存在小膠質(zhì)細胞活化狀態(tài)(圖2、3),這進一步提示在EAE發(fā)病過程中存在著小膠質(zhì)細胞的參與。與既往針對MS發(fā)病過程中的小膠質(zhì)細胞參與的研究是一致的,MS中小膠質(zhì)細胞激活后主要通過Toll樣受體活化下游通路,引起細胞內(nèi)炎性介質(zhì)釋放,進而導致炎性反應的發(fā)生。MS尸檢患者發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)病灶中存在大量淋巴細胞和巨噬細胞的浸潤,提示MS病變用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應相關,進而推測活化的小膠質(zhì)細胞通過激發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應參與了MS的發(fā)病[14]。本實驗中EAE小鼠大腦皮層病理染色觀察到的小膠質(zhì)細胞改變進一步表明PLP139-151成功誘導的EAE模型不僅在臨床發(fā)病表現(xiàn)上與MS類似,也在病理表現(xiàn)上存在與MS相契合的現(xiàn)象,這些現(xiàn)象也進一步證實PLP誘導的EAE模型適用于MS的研究。

【參考文獻】：
期刊論文
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