發(fā)布時(shí)間：2021-06-23 20:52

　　目的觀(guān)察髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白139-151(proteolipid protein,PLP_139-151)誘導(dǎo)SJL小鼠構(gòu)建的復(fù)發(fā)緩解型的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型復(fù)發(fā)期腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的病理改變。方法應(yīng)用100μg、150μg PLP_139-151多肽片段免疫SJL小鼠構(gòu)建復(fù)發(fā)緩解型EAE模型（分別簡(jiǎn)稱(chēng)為100μg PLP組、150μg PLP組）,另設(shè)健康對(duì)照組（對(duì)照組;采用與實(shí)驗(yàn)組等體積溶媒處理）,觀(guān)察35 d。觀(guān)察兩組EAE小鼠的發(fā)病情況及神經(jīng)功能殘疾進(jìn)展評(píng)分差異,選擇發(fā)病快、神經(jīng)功能殘疾進(jìn)展評(píng)分高者（計(jì)為EAE組）觀(guān)察復(fù)發(fā)期小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況。EAE組于復(fù)發(fā)期疾病高峰時(shí),對(duì)照組于相同時(shí)間點(diǎn),取小鼠大腦皮層組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)（immunohistochemical,IHC）染色及免疫熒光（immunofluorescence,IF）染色比較兩組小膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況。結(jié)果 150μg PLP組小鼠在兩個(gè)發(fā)病高峰（分別為免疫第13、28天）均早于... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志. 2019,26(06)北大核心

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【部分圖文】：

三組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分比較

動(dòng)物模型為人類(lèi)深入了解疾病發(fā)病機(jī)制及研發(fā)治療藥物提供了保障,MS實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型有多種,包括病毒模型、化學(xué)毒素模型、EAE模型等。EAE模型是最常用的擬MS實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,能夠較好模擬MS的臨床表現(xiàn)、病理特征。目前常用的免疫原為髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)[7]、PLP、髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoptein,MOG)等[8]。但無(wú)論是MBP或MOG多肽片段誘發(fā)的動(dòng)物模型均以急性發(fā)作為主,急性期維持時(shí)間短且多為單相病程。由于在MS患者中,約80%～85%為復(fù)發(fā)緩解型,PLP誘發(fā)的動(dòng)物模型具有維持時(shí)間長(zhǎng)、復(fù)發(fā)緩解等特點(diǎn),與臨床MS的復(fù)發(fā)緩解病程更相似,能更好的模擬疾病狀態(tài)。而既往針PLP誘導(dǎo)的EAE動(dòng)物模型的研究,也多集中在第一次發(fā)病期,針對(duì)其復(fù)發(fā)期的研究鮮有報(bào)道。由于在MS患者中,約80%～85%為復(fù)發(fā)緩解型,因此針對(duì)疾病復(fù)發(fā)期的研究同樣至關(guān)重要,本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用針對(duì)EAE研究的出現(xiàn)頻率較高的兩個(gè)劑量150 μg 和100 μg PLP139-151成功誘導(dǎo)SJL小鼠發(fā)病建立EAE模型,并且成功觀(guān)察到疾病緩解復(fù)發(fā)的模擬臨床過(guò)程。研究結(jié)果顯示,150 μg PLP組小鼠在每個(gè)發(fā)病高峰均早于100 μg PLP組,且神經(jīng)功能評(píng)分高于或等于100 μg PLP組。 為了深入研究疾病復(fù)發(fā)期時(shí)EAE小鼠較對(duì)照組小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞的病理差異,本研究進(jìn)一步觀(guān)察了150 μg PLP139-151誘導(dǎo)的EAE模型緩解后二次復(fù)發(fā)時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況。圖3 EAE模型組和對(duì)照組小鼠大腦皮層小膠質(zhì)細(xì)胞（Iba-1標(biāo)記）表達(dá)（IF×200)

圖 2 EAE組和對(duì)照組小鼠大腦皮層Iba-1小膠質(zhì)細(xì)胞(標(biāo)記)表達(dá)(IHC×200)。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)的免疫監(jiān)視細(xì)胞,相當(dāng)于CNS內(nèi)的巨噬細(xì)胞,是維持CNS免疫平衡的一道最主要防線(xiàn)。正常情況下,小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜息態(tài),當(dāng)機(jī)體受到體內(nèi)外異物侵襲時(shí),小膠質(zhì)細(xì)胞一方面迅速活化,釋放大量的炎性因子、趨化因子、補(bǔ)體等,通過(guò)抗原呈遞、吞噬、細(xì)胞/體液免疫等過(guò)程,及時(shí)清除異物的侵襲或者清理機(jī)體內(nèi)死亡的細(xì)胞、碎屑等[9-11]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞幾乎參與了所有中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性病變及退行性疾病,如阿爾茲海默病、帕金森病、多發(fā)性硬化等[12-13],本研究觀(guān)察到在PLP誘導(dǎo)的復(fù)發(fā)緩解型EAE小鼠在疾病復(fù)發(fā)期腦組織中存在著Iba-1+細(xì)胞的表達(dá)明顯增多的現(xiàn)象,并且同時(shí)伴隨小膠質(zhì)細(xì)胞體積增大,突起增多等相關(guān)的形態(tài)改變,提示EAE模型中可能存在小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)(圖2、3),這進(jìn)一步提示在EAE發(fā)病過(guò)程中存在著小膠質(zhì)細(xì)胞的參與。與既往針對(duì)MS發(fā)病過(guò)程中的小膠質(zhì)細(xì)胞參與的研究是一致的,MS中小膠質(zhì)細(xì)胞激活后主要通過(guò)Toll樣受體活化下游通路,引起細(xì)胞內(nèi)炎性介質(zhì)釋放,進(jìn)而導(dǎo)致炎性反應(yīng)的發(fā)生。MS尸檢患者發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)病灶中存在大量淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),提示MS病變用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)相關(guān),進(jìn)而推測(cè)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)激發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)參與了MS的發(fā)病[14]。本實(shí)驗(yàn)中EAE小鼠大腦皮層病理染色觀(guān)察到的小膠質(zhì)細(xì)胞改變進(jìn)一步表明PLP139-151成功誘導(dǎo)的EAE模型不僅在臨床發(fā)病表現(xiàn)上與MS類(lèi)似,也在病理表現(xiàn)上存在與MS相契合的現(xiàn)象,這些現(xiàn)象也進(jìn)一步證實(shí)PLP誘導(dǎo)的EAE模型適用于MS的研究。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多發(fā)性硬化動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J]. 彭真,張禮標(biāo),吳潔,孫云霄.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(04)
[2]小膠質(zhì)細(xì)胞極化在多發(fā)性硬化發(fā)病中的作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 張明,劉江紅,洪浩,尹琳琳.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
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本文編號(hào)：3245637