目的:研究逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)RANKL基因轉(zhuǎn)染對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）RANKL、OPG表達(dá)的影響,探索RANKL基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)BMSCs調(diào)控破骨細(xì)胞分化能力的可行性,為RANKL基因轉(zhuǎn)染促進(jìn)骨替代材料降解成骨作用的機(jī)制研究提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:全骨髓差速貼壁法分離培養(yǎng)、純化SD大鼠BMSCs,培養(yǎng)至第三代進(jìn)行形態(tài)學(xué)、成骨、成脂分化鑒定。構(gòu)建、鑒定攜帶RANKL基因重組逆轉(zhuǎn)錄病毒。設(shè)置RANKL轉(zhuǎn)染組(BMSCs^RANKL)、空載轉(zhuǎn)染組(BMSCs^{p BABE})、空白組（BMSCs）,RT-qPCR、WB檢測重組逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染后RANKL過表達(dá)效果。用嘌呤霉素（puro）篩選、收獲穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞BMSCs^RANKL、BMSCs^pBABE。MTT法檢測空白組、RANKL轉(zhuǎn)染組、空載轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖活性;堿性磷酸酶（ALP）活性、ALP染色及茜素紅染色法檢測RANKL轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)組、空白誘導(dǎo)組、空白組細(xì)胞的成骨分化能力;RT-qPCR、WB檢測RANKL基因轉(zhuǎn)染BMSCs細(xì)胞3、7、14、21d三組RANK... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定Figure1morphologyandmultidirectionalidentificationofBMSCsA：Gimesa染色形態(tài)學(xué)鑒定（40x）；B：成骨誘導(dǎo)21d光鏡下見礦化鈣結(jié)節(jié)（40x）；C：茜素紅染色

pBABE-puro載體圖譜

pBABE-RANKL-puro雙酶切鑒定電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]磷酸鈣/聚乳酸羥基乙酸復(fù)合骨水泥對破骨前體細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[J]. 陳娟娟,梁翠薇,葉財(cái)敏,覃媛,吳修團(tuán),謝柳蓉,李文良,廖紅兵.  口腔醫(yī)學(xué). 2016(04)
[2]磷酸鈣骨水泥凝固初期的鈣磷降解規(guī)律探索及對RAW264.7細(xì)胞增殖影響的研究[J]. 覃媛,陸建志,張?zhí)?梁翠薇,陳娟娟,葉財(cái)敏,廖紅兵.  口腔醫(yī)學(xué). 2015(03)
[3]RANKL,a necessary chance for clinical application to osteoporosis and cancer-related bone diseases[J]. Hisataka Yasuda.  World Journal of Orthopedics. 2013(04)
[4]間斷流體力學(xué)對骨髓基質(zhì)來源的成骨細(xì)胞分化及功能的影響[J]. 唐開,黨耕町,郭昭慶.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2002(10)



本文編號：3235385