志賀菌可導(dǎo)致菌痢,其致病性主要在于毒力因子的編碼產(chǎn)物對(duì)粘膜上皮的毒性和侵襲作用,部分毒力基因存在于噬菌體和質(zhì)粒等可移動(dòng)的遺傳元件上,可通過HGT方式在細(xì)菌中傳播導(dǎo)致更多高毒菌株的出現(xiàn)。CRISPR/Cas系統(tǒng)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌處理質(zhì)粒以及噬菌體等外源物質(zhì)的原核生物的免疫系統(tǒng)。因?yàn)榇讼到y(tǒng)對(duì)于細(xì)菌遺傳物質(zhì)的整合和獲得具有重要作用,導(dǎo)致CRISPR/Cas系統(tǒng)受到越來(lái)越多的關(guān)注。目前關(guān)于志賀菌CRISPR/Cas系統(tǒng)的研究較少,且關(guān)于志賀菌中該系統(tǒng)與毒力基因的關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。目的探索志賀菌中CRISPR/Cas系統(tǒng)的分布及特征,初步探討該系統(tǒng)與毒力基因的關(guān)系。方法1.根據(jù)Gen Bank中宋內(nèi)志賀菌53G和Ss046以及福氏志賀菌2457T的CRISPR及cas基因的序列信息,利用Primer designing tool在線軟件設(shè)計(jì)引物。2.對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的59株志賀菌中CRISPR及cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,并通過生物信息學(xué)軟件對(duì)序列進(jìn)行分析。3.PCR擴(kuò)增志賀菌毒力基因ipa H、ial、ipa BCD... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擴(kuò)增CRISPR所需引物在志賀菌基因組中的位置

圖 3.1 志賀菌 CRISPR 的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Aladder Marker，M2： DL2000Marker。1-3 分別對(duì)應(yīng)基 和 2B，CRISPR2；3A 和 3B，CRISPR3。RISPR 相關(guān)蛋白基因的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果包含 CRISPR1/Cas 系統(tǒng)退化的菌株）志賀菌的 C 擴(kuò)增。以菌株 A(mel-sf2006242/zz)和菌株 B (me菌株 A 和 B 的 cas2-cas1 基因的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度大cas5 基因片段長(zhǎng)度（2600bp）較菌株 B（1300bp因片段中含有插入序列；菌株 A 和 B 的 cas7 基因 A 的 cse2 基因片段長(zhǎng)度（1600bp）較菌株 B 長(zhǎng)，；菌株 A 和 B 的 cse1-cas3 的基因片段長(zhǎng)度約為

圖 3.2 志賀菌 CRISPR 相關(guān)蛋白基因的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果L3000Marker，M2：100bp DNAladder Marker.A和B分別代表菌株mel-sff2008123/zz。1-6 分別對(duì)應(yīng)基因如下：1A 和 1B，cas2-cas1；2A 和 2B，ca，cas7；4A 和 4B，cse2；5A 和 5B，cse1-cas3。賀菌 CRISPR 的測(cè)序結(jié)果分析I-E 型 CRISPR/Cas 系統(tǒng)結(jié)果分析賀菌 CRISPR1 的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行測(cè)序發(fā)現(xiàn)：47 株志賀菌可序列和間隔序列；在剩余的 12 株福氏志賀菌中僅可檢測(cè)到部分重復(fù)序列。通過對(duì) CRISPR1 的分析發(fā)現(xiàn)[7]：間隔序列數(shù)目最多2 個(gè)，一共發(fā)現(xiàn) 15 條特異間隔序列。不含間隔序列的菌株有 1目為 2 的 28 株志賀菌，不論血清型為宋內(nèi)志賀菌（6 株）還2 株）其間隔序列是完全相同的；含有 3 條間隔序列的菌株有 1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]志賀菌中CRISPR的分布及其結(jié)構(gòu)特征[D]. 薛澤潤(rùn).鄭州大學(xué) 2014
[2]河南省福氏志賀菌株中毒力相關(guān)基因及She毒力島的分布研究[D]. 戴廣明.大連醫(yī)科大學(xué) 2008



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