目的:探討人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）的間充質(zhì)干細(xì)胞特性,以及在體外經(jīng)誘導(dǎo)后能否向膽管上皮細(xì)胞分化,為膽管生物工程奠定基礎(chǔ)。方法:1)取足月剖宮產(chǎn)胎盤(pán)羊膜組織,用酶消化法分離出人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,取第3代細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鑒定h AMSCs表型特征,免疫熒光染色檢測(cè)hAMSCs波形蛋白和CK-19的表達(dá),在體外經(jīng)誘導(dǎo)向成骨、成脂肪細(xì)胞分化。2)將h AMSCs體外定向分化為肝干細(xì)胞:將第3代h AMSCs接種于6孔板加入含肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的LG-DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)分化形態(tài),細(xì)胞出現(xiàn)圓形、卵圓形或多角形改變后,收集細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行生化檢測(cè)堿性磷酸酶、甲胎蛋白及白蛋白含量。3)誘導(dǎo)肝干細(xì)胞向膽管上皮細(xì)胞分化:向上述誘導(dǎo)后的細(xì)胞6孔板內(nèi),加入含干細(xì)胞因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子的LG-DMEM培養(yǎng)液,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及分化情況,出現(xiàn)膽管內(nèi)皮細(xì)胞典型形態(tài)時(shí),通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞角蛋白CK19的表達(dá),以及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time quantitative polymeras... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

hAMSCs形態(tài)學(xué)觀察（40×）

圖 2 hAMSCs 表面標(biāo)記的表達(dá)A：表面標(biāo)記 CD73 B：表面標(biāo)記 CD44 C：表面標(biāo)記 CD90D：表面標(biāo)記 CD105 E：CD34-CD11b-CD19-CD45-HLA-DR2.2.2 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 的表達(dá)免疫熒光法檢測(cè)第 3 代 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 表達(dá)的結(jié)果：CK19 呈陰性表達(dá)；波形蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率 98.66%±0.21% 。（見(jiàn)圖 3）2.2.3 hAMSCs 多向分化的特性取第 3 代 hAMSCs 在體外經(jīng)誘導(dǎo)分化為成脂肪細(xì)胞、成骨分化，誘導(dǎo)培養(yǎng) 21 天后，分別通過(guò)油紅 O、茜素紅染液染色觀察，成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞油紅 O 染色后可見(jiàn)脂滴。成骨誘導(dǎo)的細(xì)胞茜素紅染液染色后可見(jiàn)礦化結(jié)節(jié)，呈橘紅色。（見(jiàn)圖 4）

圖 3 hAMSCs 的 CK19 及波形蛋白的表達(dá)（100×）A：hAMSCs 不表達(dá) CK19 B：hAMSCs 表達(dá)波形蛋白（綠色） C:DAPI（藍(lán)色） D:B、C 合并圖 4 hAMSCs 向成脂肪細(xì)胞、成骨分化 21 天后染色結(jié)果（100×）A：成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)后油紅 O 染色 B：成骨誘導(dǎo)后茜素紅染液染色A B

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]體外誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞分化為角膜上皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 姚敏.暨南大學(xué) 2013
[2]體外誘導(dǎo)人羊膜細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化[D]. 劉娟.遵義醫(yī)學(xué)院 2012



本文編號(hào)：3217788