目的:探討人羊膜間充質(zhì)干細胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）的間充質(zhì)干細胞特性,以及在體外經(jīng)誘導(dǎo)后能否向膽管上皮細胞分化,為膽管生物工程奠定基礎(chǔ)。方法:1)取足月剖宮產(chǎn)胎盤羊膜組織,用酶消化法分離出人羊膜間充質(zhì)干細胞,取第3代細胞進行流式細胞術(shù)檢測鑒定h AMSCs表型特征,免疫熒光染色檢測hAMSCs波形蛋白和CK-19的表達,在體外經(jīng)誘導(dǎo)向成骨、成脂肪細胞分化。2)將h AMSCs體外定向分化為肝干細胞:將第3代h AMSCs接種于6孔板加入含肝細胞生長因子的LG-DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化,觀察細胞生長分化形態(tài),細胞出現(xiàn)圓形、卵圓形或多角形改變后,收集細胞培養(yǎng)液進行生化檢測堿性磷酸酶、甲胎蛋白及白蛋白含量。3)誘導(dǎo)肝干細胞向膽管上皮細胞分化:向上述誘導(dǎo)后的細胞6孔板內(nèi),加入含干細胞因子、肝細胞生長因子、表皮生長因子的LG-DMEM培養(yǎng)液,觀察細胞生長及分化情況,出現(xiàn)膽管內(nèi)皮細胞典型形態(tài)時,通過免疫熒光染色檢測細胞角蛋白CK19的表達,以及實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time quantitative polymeras... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

hAMSCs形態(tài)學(xué)觀察（40×）

圖 2 hAMSCs 表面標(biāo)記的表達A：表面標(biāo)記 CD73 B：表面標(biāo)記 CD44 C：表面標(biāo)記 CD90D：表面標(biāo)記 CD105 E：CD34-CD11b-CD19-CD45-HLA-DR2.2.2 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 的表達免疫熒光法檢測第 3 代 hAMSCs 波形蛋白和 CK19 表達的結(jié)果：CK19 呈陰性表達；波形蛋白呈陽性表達，陽性表達率 98.66%±0.21% 。（見圖 3）2.2.3 hAMSCs 多向分化的特性取第 3 代 hAMSCs 在體外經(jīng)誘導(dǎo)分化為成脂肪細胞、成骨分化，誘導(dǎo)培養(yǎng) 21 天后，分別通過油紅 O、茜素紅染液染色觀察，成脂肪細胞誘導(dǎo)的細胞油紅 O 染色后可見脂滴。成骨誘導(dǎo)的細胞茜素紅染液染色后可見礦化結(jié)節(jié)，呈橘紅色。（見圖 4）

圖 3 hAMSCs 的 CK19 及波形蛋白的表達（100×）A：hAMSCs 不表達 CK19 B：hAMSCs 表達波形蛋白（綠色） C:DAPI（藍色） D:B、C 合并圖 4 hAMSCs 向成脂肪細胞、成骨分化 21 天后染色結(jié)果（100×）A：成脂肪細胞誘導(dǎo)后油紅 O 染色 B：成骨誘導(dǎo)后茜素紅染液染色A B

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人羊膜在骨科領(lǐng)域的研究進展[J]. 湯開,吳佳懌,熊澤康,郭曉東.  國際骨科學(xué)雜志. 2017(06)
[2]良性膽管狹窄臨床診療現(xiàn)狀[J]. 張博皓,張小文.  河南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(03)
[3]Pedicled omental patch as a bridging procedure for iatrogenic bile duct injury[J]. Jun Jie Ng,Alfred Wei Chieh Kow.  World Journal of Gastroenterology. 2017(36)
[4]人脫細胞羊膜在構(gòu)建組織工程支架中的應(yīng)用及研究方向[J]. 楊繼濱,熊華章,李豫皖,劉毅.  中國組織工程研究. 2017(25)
[5]臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)的研究進展[J]. 馮可欣,詹昱,曲佳,巫進明,陳玲珍,楊郁青,譚明珠,陳燕梅,譚雪芳,羅英.  中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用. 2017(13)
[6]人羊膜上皮細胞培養(yǎng)工藝的優(yōu)化及生物學(xué)特性[J]. 劉超,徐志國,王紹紅,程紅玲,楊旭巍,貢波,劉洋,徐春艷.  中國組織工程研究. 2017(13)
[7]TGF-β1聯(lián)合VEGF對人羊膜間充質(zhì)干細胞向韌帶成纖維細胞體外分化作用的研究[J]. 鄒剛,李豫皖,金瑛,朱喜忠,楊繼濱,王勝民,尤奇,熊華章,劉毅.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2017(05)
[8]共培養(yǎng)的角膜上皮細胞誘導(dǎo)人羊膜上皮細胞分化為角膜上皮樣細胞[J]. 劉小勇,陳劍,周清,徐緯,葉龍燕,周健庭,金玲.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(04)
[9]人胎盤羊膜上皮細胞的分離鑒定及多向誘導(dǎo)分化[J]. 李萍,王久存,陸瑤,許惠利.  中國組織工程研究. 2017(09)
[10]人羊膜細胞外基質(zhì)修復(fù)尿道下裂的實驗研究[J]. 舒林飛,田源,王雷,肖躍海,孫超,唐開發(fā),孫發(fā).  貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(03)

碩士論文
[1]體外誘導(dǎo)人羊膜上皮細胞分化為角膜上皮樣細胞的實驗研究[D]. 姚敏.暨南大學(xué) 2013
[2]體外誘導(dǎo)人羊膜細胞向神經(jīng)細胞分化[D]. 劉娟.遵義醫(yī)學(xué)院 2012



本文編號：3217788