目的:探討膠原酶消化法分離豬主動脈瓣內(nèi)皮細(xì)胞的可靠性及可重復(fù)性。方法:通過膠原酶消化法從新鮮豬主動脈瓣膜表面分離并培養(yǎng)主動脈瓣內(nèi)皮細(xì)胞,通過免疫熒光染色法和流式細(xì)胞儀對獲得的瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）的表型加以鑒定。結(jié)果:通過膠原酶消化法可成功分離VEC,光鏡下VEC呈鋪路石樣分布,為典型的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)。免疫熒光染色示VEC的CD31表達(dá)為陽性,波形蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達(dá)為陰性,分離獲得的細(xì)胞中VEC陽性率高,間質(zhì)細(xì)胞污染率較低;流式細(xì)胞儀示分離獲得的細(xì)胞Vimentin表達(dá)陰性（3.06%）,CD31表達(dá)陽性（99.01%）,再次驗證分離獲得的VEC純度高。結(jié)論:膠原酶消化法可從豬主動脈瓣膜分離獲得純度較高的VEC,該方法簡單,可重復(fù)性好。 

【文章來源】：國際心血管病雜志. 2020,47(01)

【文章頁數(shù)】：4 頁

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免疫熒光染色法鑒定VEC細(xì)胞表型

圖1 免疫熒光染色法鑒定VEC細(xì)胞表型VEC在CAVD發(fā)生過程中的始動作用機(jī)制可能為:(1)血流動力學(xué)改變對VEC的影響。有研究表明,在紊亂的血流剪切力作用下,與促鈣化、炎性反應(yīng)相關(guān)的基因,包括骨形成蛋白-4(BMP-4)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)等的表達(dá)升高[14]。(2)VEC通過EndMT成為具有增殖能力的VIC。Paruchufi等[15]研究發(fā)現(xiàn),成年人瓣膜中存在同時表達(dá)CD31、α-SMA的細(xì)胞,即發(fā)生EndMT的細(xì)胞。Dal-Bianco等[16]通過構(gòu)建機(jī)械損傷羊瓣膜模型,發(fā)現(xiàn)處理組中內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生EndMT的細(xì)胞數(shù)量明顯高于對照組。(3)VEC旁分泌機(jī)制發(fā)生變化,影響 VIC 的形態(tài)學(xué)和功能。VEC主要通過旁分泌一氧化氮(NO)和C型利尿鈉肽(CNP)對VIC進(jìn)行調(diào)控[17-18]。然而,目前關(guān)于VEC在CAVD進(jìn)程中的具體作用機(jī)制尚未達(dá)成共識。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鈣化性主動脈瓣疾病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 賀鈺斌,朱丹.  中國胸心血管外科臨床雜志. 2018(02)
[2]主動脈瓣鈣化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 高佳斌,徐志云.  國際心血管病雜志. 2016(04)



本文編號：3215245