CD82/KAI1是一種廣泛存在腫瘤抑制因子，它能抑制腫瘤細(xì)胞的能動(dòng)性和侵襲性。腫瘤是危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性中，侵襲性和轉(zhuǎn)移性尤為關(guān)鍵，這也是惡性腫瘤的重要標(biāo)志。比較發(fā)現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物胚胎著床時(shí)，滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力和行為方式與腫瘤細(xì)胞十分相似。在小鼠妊娠過(guò)程中，胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入母體子宮內(nèi)膜與蛻膜共同構(gòu)成胎盤，以保證妊娠的正常進(jìn)行。滋養(yǎng)層細(xì)胞的過(guò)度侵入或侵入不足都會(huì)對(duì)母體和胚胎的發(fā)育造成傷害。根據(jù)本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：CD82/KAI1在小鼠的子宮內(nèi)膜上均有表達(dá)，因此推測(cè)，CD82/KAI1對(duì)蛻膜細(xì)胞促使滋養(yǎng)層侵襲有影響。目的：研究CD82/KAI1在小鼠子宮蛻膜細(xì)胞及外胎盤錐的表達(dá)及其對(duì)外胎盤錐侵襲的影響。方法：1.將設(shè)計(jì)好的CD82/KAI1干擾序列插入pSES-HUS載體中，酶切鑒定和測(cè)序檢測(cè)，構(gòu)建pAdeasy-SES-HUS-CD82/KAI1siRNA和pAdeasy-SES-HUS載體；2.體外分離培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞并誘導(dǎo)蛻膜化，采用RT-PCR、westernblot技術(shù)檢測(cè)CD82/KAI1在蛻膜細(xì)胞中的表達(dá)；3.取d8小鼠子宮，冰... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pSES-HUS-CD82/KAI1siRNA的測(cè)序鑒定

圖1 .3 重 組腺 病 毒 載體 的Pa cⅠ 酶 切鑒 定準(zhǔn);1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d eFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H 胞， 2 4 h 在熒 光 顯 微鏡 下 可觀 察到 少 量的 漸增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 細(xì) 胞發(fā) 出 紅 ， 收 獲 病 毒 原 液 ， 將 其 繼 續(xù) 感 染 HE K 2 大 量 擴(kuò) 增 。 滴 度 測(cè) 試 顯 示 重 組 腺 病e a s y- S ES -H US 滴度 分 別高 達(dá) 7. 2× 10 11 pf u

4 . 4 k b圖1 .3 重 組腺 病 毒 載體 的Pa cⅠ 酶 切鑒 定M: λ - H in d ⅢD N A標(biāo) 準(zhǔn);1 :p A d - e a s y -1 ;2 :p A d e a s y -S E S- H U S; 3 :p A d e a s y -S E S -H U S -C D 8 2 s iR N AFi g 1 . 3 D ig e s ti o n o f re co mb in a nt pl a s m id w it h Pa c Ⅰ2 .3 重組 p Ad e a s y -S ES -H U S - CD 8 2/ KA I 1s i RN A 腺病 毒 的 包裝 pA d e a s y- S ES -H U S -C D8 2 / KA I 1 s i R NA 、p Ad e a s y- S ES -H U S 經(jīng) P ac Ⅰ 酶 切 、純 化后轉(zhuǎn) 染 HE K 2 9 3 細(xì) 胞， 2 4 h 在熒 光 顯 微鏡 下 可觀 察到 少 量的 紅色 熒 光出 現(xiàn)， 隨 著 培 養(yǎng)時(shí) 間 延長(zhǎng) 熒光 逐 漸增 多， 在 72 h 后 8 0% 以 上的 細(xì) 胞發(fā) 出 紅色 熒 光 （圖 2- 4 ） ，10 ~ 1 天 后 病 毒 顆 粒 成 熟 ， 收 獲 病 毒 原 液 ， 將 其 繼 續(xù) 感 染 HE K 2 9 3 細(xì) 胞 進(jìn) 行 3 輪 擴(kuò) 增 的病 毒 液 ， 病 毒 得 到 大 量 擴(kuò) 增 。 滴 度 測(cè) 試 顯 示 重 組 腺 病 毒 Ad e a s y -S ES - HU S C D8 2 s i R NA 和 Ad e a s y- S ES -H US 滴度 分 別高 達(dá) 7. 2× 10 11 pf u / m l 、7 . 5 ×1 0 1 1pf u / m l。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組腺病毒CD82/KAI1對(duì)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表達(dá)的影響[J]. 尉曉蔚,張倩,譚冬梅,趙邦霞,何通川,譚毅.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(07)
[2]腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宮的表達(dá)及其對(duì)小鼠胚胎著床的影響[J]. 譚冬梅,趙邦霞,尉曉蔚,彭洪英,賴國(guó)旗,何明忠,譚毅.  生殖與避孕. 2007(09)
[3]腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子CD82/KAI1基因在小鼠子宮內(nèi)膜的動(dòng)態(tài)表達(dá)[J]. 王煥英,譚冬梅,何明忠,王立芝,譚毅.  生殖與避孕. 2007(01)
[4]KAI1/CD82在早孕小鼠子宮內(nèi)膜組織的表達(dá)研究[J]. 何明忠,王煥英,譚冬梅,譚毅.  四川動(dòng)物. 2006(04)
[5]KAI1/CD82蛋白表達(dá)與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J]. 季潤(rùn)元,沈陽(yáng),王成海,孫澤,馮振卿.  實(shí)用癌癥雜志. 2004(04)
[6]非小細(xì)胞肺癌中KAI1/CD82和CD44的表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系[J]. 陳清勇,林仙明,周建英,安舟,楊凌,江中勇.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2004(02)
[7]抑癌基因KAI1對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J]. 劉莉,李祖國(guó),楊光之,丁彥青.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2003(06)
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[9]腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1/CD82在不同轉(zhuǎn)移潛能癌細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李珊珊,方偉崗,鐘鎬鎬,由江峰,沈瓊.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 1999(09)
[10]RNAi與腫瘤相關(guān)基因及在腫瘤治療中的研究[J]. 喻彬,陳煒.  國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志. 2007 (04)



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