目的篩選更優(yōu)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,探討其用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細胞并表達所需目的蛋白的可行性。方法分別用RNAiMax及MessageMax將modGFP轉(zhuǎn)染入MEF細胞,應用熒光顯微鏡、流式細胞分析儀檢測并比較兩種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達效果。將更優(yōu)的轉(zhuǎn)染試劑用于modGFP轉(zhuǎn)染其他各種類型細胞的實驗中,采用同樣的方法分析modGFP的轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達情況。將modGFP與modmCherry共轉(zhuǎn)MEF細胞,熒光顯微鏡觀察共轉(zhuǎn)的情況。將modnGFP及modmTBX5轉(zhuǎn)染MEF細胞,熒光顯微鏡觀察核內(nèi)蛋白的表達情況。結(jié)果 MEF細胞轉(zhuǎn)染modGFP 24 h后,流式分析發(fā)現(xiàn)MessageMax的轉(zhuǎn)染效率為（83.33%±3.23%）,略高于RNAiMax的（78.77%±6.12%）,兩者沒有統(tǒng)計學差異,但是流式分析和熒光顯微鏡觀察均表明MessageMax轉(zhuǎn)染后1周內(nèi)的蛋白翻譯表達效率更高,是更高效的modRNA轉(zhuǎn)染試劑。MessageMax能將modC;FP高效轉(zhuǎn)染人3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞中,并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及... 

【文章來源】：組織工程與重建外科雜志. 2019,15(06)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

modRNA制備過程中質(zhì)粒、酶切、PCR、體外轉(zhuǎn)錄的鑒定結(jié)果

圖2 兩種modRNA轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達強度

modGFP轉(zhuǎn)染3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞的熒光圖及流式分析


本文編號：3213224