背景破骨細(xì)胞抑制凝集素相關(guān)蛋白2（Osteoclast inhibitory lectin related protein2,OCILRP2）也被稱為clr-g,是一種Ⅱ型跨膜蛋白,屬于C型凝集素相關(guān)（clr）蛋白家族。OCILRP2基因最初被發(fā)現(xiàn)在骨質(zhì)形成中發(fā)揮作用,可表達(dá)于B細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞（DC）和活化的T細(xì)胞。OCILRP2與配體NKRP1f結(jié)合,在T細(xì)胞中作為一種共刺激分子促進(jìn)細(xì)胞因子IL-2的分泌和T細(xì)胞的增殖。沉默OCILRP2的T淋巴細(xì)胞,增殖能力和分泌細(xì)胞因子IL-2的水平顯著降低。體外阻斷OCILRP2受體信號(hào)可抑制LPS誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞的成熟與活化。巨噬細(xì)胞是炎癥反應(yīng)中的效應(yīng)細(xì)胞,依靠其強(qiáng)大的免疫識(shí)別和清除異物的能力,在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面,發(fā)揮著強(qiáng)大功能。Toll樣受體（TLR）是巨噬細(xì)胞表面的一類重要的模式識(shí)別受體,其主要成員Toll樣受體4（Toll-LikeReceptor4,TLR4）主要分布于巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞等,可以識(shí)別革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖（LPS）,并被其激活,從而啟動(dòng)TLR4信號(hào)通路,導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子和干擾素的產(chǎn)生,從而... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
1 試劑與設(shè)備
    1.1 細(xì)胞系與主要試劑
    1.2 儀器與設(shè)備
    1.3 主要溶劑的配制
2 方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.1.3 細(xì)胞凍存
        2.1.4 細(xì)胞傳代
        2.1.5 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    2.2 敲低OCILRP2穩(wěn)定株的篩選
        2.2.1 構(gòu)建OCILRP2shRNA慢病毒載體
        2.2.2 慢病毒顆粒的制備
        2.2.3 篩選嘌呤霉素的最佳濃度
        2.2.4 慢病毒顆粒感染與細(xì)胞篩選
    2.3 敲低OCILRP2的驗(yàn)證
        2.3.1 Westernblot檢測(cè)細(xì)胞中OCILRP2的蛋白表達(dá)
        2.3.2 RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中OCILRP2的表達(dá)
    2.4 細(xì)胞功能檢測(cè)
        2.4.1 細(xì)胞粘附能力的檢測(cè)
        2.4.2 細(xì)胞遷移能力的檢測(cè)
        2.4.3 細(xì)胞內(nèi)吞能力的檢測(cè)
        2.4.4 細(xì)胞因子的檢測(cè)
        2.4.5 細(xì)胞NO分泌的檢測(cè)
    2.5 TLR4通路中相關(guān)蛋白的檢測(cè)
        2.5.1 信號(hào)通路中蛋白的檢測(cè)
        2.5.2 NF-?B的活性檢測(cè)
        2.5.3 NF-?B核轉(zhuǎn)位的檢測(cè)
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 沉默OCILRP2基因的驗(yàn)證
    3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的粘附能力
    3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的遷移能力
        3.3.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的劃痕愈合能力
        3.3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的遷移能力
        3.3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的趨化能力
    3.4 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的內(nèi)吞功能
        3.4.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞飲能力
        3.4.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞的吞噬能力
    3.5 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的釋放
    3.6 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞分泌NO及表達(dá)iNOS的能力
    3.7 沉默OCILRP2不影響C-Raf、AKT、p44/42、p38的磷酸化水平
    3.8 沉默OCILRP2下調(diào)TBK1、IRF3、TAK1、IκB-α、p65的磷酸化水平
    3.9 沉默OCILRP2抑制巨噬細(xì)胞NF-?B的活化
    3.10 沉默OCILRP2抑制巨噬細(xì)胞NF-?B核轉(zhuǎn)位
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議及研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hwangryunhaedoktang exerts anti-inflammation on LPS-induced NO production by suppressing MAPK and NF-κB activation in RAW264.7 macrophages[J]. Byung Hyuk Han,Yun Jung Lee,Jung Joo Yoon,Eun Sik Choi,Seung Namgung,Xian Jun Jin,Da Hye Jeong,Dae Gill Kang,Ho Sub Lee.  Journal of Integrative Medicine. 2017(04)
[2]TLR4信號(hào)通路與抑郁癥的研究進(jìn)展[J]. 汪露,陳晉東.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(06)



本文編號(hào)：3207894