背景破骨細胞抑制凝集素相關蛋白2（Osteoclast inhibitory lectin related protein2,OCILRP2）也被稱為clr-g,是一種Ⅱ型跨膜蛋白,屬于C型凝集素相關（clr）蛋白家族。OCILRP2基因最初被發(fā)現(xiàn)在骨質形成中發(fā)揮作用,可表達于B細胞,樹突狀細胞（DC）和活化的T細胞。OCILRP2與配體NKRP1f結合,在T細胞中作為一種共刺激分子促進細胞因子IL-2的分泌和T細胞的增殖。沉默OCILRP2的T淋巴細胞,增殖能力和分泌細胞因子IL-2的水平顯著降低。體外阻斷OCILRP2受體信號可抑制LPS誘導的樹突狀細胞的成熟與活化。巨噬細胞是炎癥反應中的效應細胞,依靠其強大的免疫識別和清除異物的能力,在維持機體內環(huán)境穩(wěn)定等方面,發(fā)揮著強大功能。Toll樣受體（TLR）是巨噬細胞表面的一類重要的模式識別受體,其主要成員Toll樣受體4（Toll-LikeReceptor4,TLR4）主要分布于巨噬細胞、樹突狀細胞以及T淋巴細胞等,可以識別革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖（LPS）,并被其激活,從而啟動TLR4信號通路,導致促炎細胞因子和干擾素的產生,從而... 

【文章來源】：河南大學河南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
1 試劑與設備
    1.1 細胞系與主要試劑
    1.2 儀器與設備
    1.3 主要溶劑的配制
2 方法
    2.1 細胞培養(yǎng)和轉染
        2.1.1 細胞培養(yǎng)
        2.1.2 細胞復蘇
        2.1.3 細胞凍存
        2.1.4 細胞傳代
        2.1.5 細胞計數(shù)
        2.1.6 細胞轉染
    2.2 敲低OCILRP2穩(wěn)定株的篩選
        2.2.1 構建OCILRP2shRNA慢病毒載體
        2.2.2 慢病毒顆粒的制備
        2.2.3 篩選嘌呤霉素的最佳濃度
        2.2.4 慢病毒顆粒感染與細胞篩選
    2.3 敲低OCILRP2的驗證
        2.3.1 Westernblot檢測細胞中OCILRP2的蛋白表達
        2.3.2 RT-qPCR檢測細胞中OCILRP2的表達
    2.4 細胞功能檢測
        2.4.1 細胞粘附能力的檢測
        2.4.2 細胞遷移能力的檢測
        2.4.3 細胞內吞能力的檢測
        2.4.4 細胞因子的檢測
        2.4.5 細胞NO分泌的檢測
    2.5 TLR4通路中相關蛋白的檢測
        2.5.1 信號通路中蛋白的檢測
        2.5.2 NF-?B的活性檢測
        2.5.3 NF-?B核轉位的檢測
    2.6 統(tǒng)計學分析
3 結果
    3.1 沉默OCILRP2基因的驗證
    3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的粘附能力
    3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的遷移能力
        3.3.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的劃痕愈合能力
        3.3.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的遷移能力
        3.3.3 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的趨化能力
    3.4 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的內吞功能
        3.4.1 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的吞飲能力
        3.4.2 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞的吞噬能力
    3.5 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞炎性細胞因子的釋放
    3.6 沉默OCILRP2抑制RAW264.7巨噬細胞分泌NO及表達iNOS的能力
    3.7 沉默OCILRP2不影響C-Raf、AKT、p44/42、p38的磷酸化水平
    3.8 沉默OCILRP2下調TBK1、IRF3、TAK1、IκB-α、p65的磷酸化水平
    3.9 沉默OCILRP2抑制巨噬細胞NF-?B的活化
    3.10 沉默OCILRP2抑制巨噬細胞NF-?B核轉位
4 討論
5 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間參加的學術會議及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hwangryunhaedoktang exerts anti-inflammation on LPS-induced NO production by suppressing MAPK and NF-κB activation in RAW264.7 macrophages[J]. Byung Hyuk Han,Yun Jung Lee,Jung Joo Yoon,Eun Sik Choi,Seung Namgung,Xian Jun Jin,Da Hye Jeong,Dae Gill Kang,Ho Sub Lee.  Journal of Integrative Medicine. 2017(04)
[2]TLR4信號通路與抑郁癥的研究進展[J]. 汪露,陳晉東.  中南大學學報(醫(yī)學版). 2017(06)



本文編號：3207894