目的:流行病學表明,自身免疫性疾病作為人類生命安全一大威脅,其患病率正在逐年遞增,且無很好的治療手段。而CD4⁺T細胞與多種自身免疫病的發(fā)生、發(fā)展密切相關,其中Th1細胞和Th17細胞是其致病的主要淋巴細胞群體,但其具體發(fā)病機制尚不清楚。有研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（endoplasmic reticulum stress,ERS）引起的未折疊蛋白反應（unfolded protein response,UPR）在自身免疫病的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用。而由Lin-12樣抑制子/增強子（Lin-12-like suppressor/enhancer,Sel1L）組成的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關蛋白降解復合體（endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD）在維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài),清除未折疊及錯誤折疊蛋白中起到了不可或缺的作用。因此,本課題通過Cre-loxP重組酶系統(tǒng)建立了T細胞特異性敲除Sel1L基因小鼠模型,初步探討了Sel1L分子對CD4⁺T細胞活化、增殖與亞群分化的調(diào)控作用,進而揭示了Sel1L分子在自身免疫性... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(ERS)與未折疊蛋白反應(UPR)
        1.1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)質(zhì)量控制系統(tǒng)
        1.1.2 PERK-eIF2α信號途徑
        1.1.3 ATF6信號途徑
        1.1.4 IRE1信號途徑
    1.2 Sel1L分子
        1.2.1 Sel1L與ERAD
        1.2.2 Sel1L與UPR
    1.3 UPR與自身免疫病
    1.4 T淋巴細胞
        1.4.1 T淋巴細胞亞群分化
        1.4.2 T淋巴細胞活化與TCR信號通路
    1.5 本實驗研究目的、方法、技術路線及課題意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 技術路線
        1.5.4 研究意義
第二章 T細胞定向敲除Sel1L基因小鼠模型的建立
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠哺育與配型
        2.2.2 小鼠基因型鑒定
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 Sel1L基因?qū)罨疌D4~+T細胞增殖及凋亡的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗儀器與耗材
        3.1.3 實驗商品化試劑
        3.1.4 實驗自配試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 流式細胞術檢測脾臟淋巴細胞表面標志CD69、CD25
        3.2.2 CFSE標記法檢測淋巴細胞增殖
        3.2.3 Ki67核染色檢測淋巴細胞增殖
        3.2.4 Anti-CD3/anti-CD28及ConA誘導脾臟淋巴細胞凋亡
    3.3 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 Sel1L不引起T淋巴細胞活化強度的改變
        3.4.2 Sel1L基因敲除促進T淋巴細胞增殖
        3.4.3 Sel1L基因敲除促進活化T淋巴細胞凋亡
    3.5 討論
第四章 Sel1L基因調(diào)節(jié)CD4~+T淋巴細胞分化
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 實驗儀器與耗材
        4.1.3 實驗商品化試劑
        4.1.4 自配試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 胞內(nèi)因子染色檢測CD4~+T細胞壓群Th1、Th2及Th17細胞
        4.2.2 流式細胞術核染色檢測Treg細胞
        4.2.3 流式細胞術核染色檢測轉(zhuǎn)錄因子T-bet、ROR-γt
        4.2.4 Th1、Th17體外定向誘導分化
        4.2.5 TCR信號通路相關指標檢測
    4.3 統(tǒng)計學分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 Sel1L缺失影響脾臟活化CD4~+T細胞亞群
        4.4.2 Sel1L缺失上調(diào)Th1、Th17特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet、ROR-γt
        4.4.3 Sel1L缺失促進Th1、Th17分化
        4.4.4 Sel1L缺失激活TCR信號通路
    4.5 討論
第五章 Sel1L基因影響CD4~+T細胞UPR信號通路
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 實驗儀器與耗材
        5.1.3 實驗試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 CD4~+T細胞UPR相關蛋白檢測
    5.3 實驗結(jié)果
    5.4 討論
第六章 主要結(jié)論和展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章及專利申請



本文編號：3188409