目的:流行病學(xué)表明,自身免疫性疾病作為人類生命安全一大威脅,其患病率正在逐年遞增,且無很好的治療手段。而CD4⁺T細(xì)胞與多種自身免疫病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),其中Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞是其致病的主要淋巴細(xì)胞群體,但其具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚。有研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）引起的未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response,UPR）在自身免疫病的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用。而由Lin-12樣抑制子/增強(qiáng)子（Lin-12-like suppressor/enhancer,Sel1L）組成的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解復(fù)合體（endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD）在維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài),清除未折疊及錯(cuò)誤折疊蛋白中起到了不可或缺的作用。因此,本課題通過Cre-loxP重組酶系統(tǒng)建立了T細(xì)胞特異性敲除Sel1L基因小鼠模型,初步探討了Sel1L分子對CD4⁺T細(xì)胞活化、增殖與亞群分化的調(diào)控作用,進(jìn)而揭示了Sel1L分子在自身免疫性... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)與未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)
        1.1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)質(zhì)量控制系統(tǒng)
        1.1.2 PERK-eIF2α信號(hào)途徑
        1.1.3 ATF6信號(hào)途徑
        1.1.4 IRE1信號(hào)途徑
    1.2 Sel1L分子
        1.2.1 Sel1L與ERAD
        1.2.2 Sel1L與UPR
    1.3 UPR與自身免疫病
    1.4 T淋巴細(xì)胞
        1.4.1 T淋巴細(xì)胞亞群分化
        1.4.2 T淋巴細(xì)胞活化與TCR信號(hào)通路
    1.5 本實(shí)驗(yàn)研究目的、方法、技術(shù)路線及課題意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究方法
        1.5.3 技術(shù)路線
        1.5.4 研究意義
第二章 T細(xì)胞定向敲除Sel1L基因小鼠模型的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠哺育與配型
        2.2.2 小鼠基因型鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 Sel1L基因?qū)罨疌D4~+T細(xì)胞增殖及凋亡的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)商品化試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)自配試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志CD69、CD25
        3.2.2 CFSE標(biāo)記法檢測淋巴細(xì)胞增殖
        3.2.3 Ki67核染色檢測淋巴細(xì)胞增殖
        3.2.4 Anti-CD3/anti-CD28及ConA誘導(dǎo)脾臟淋巴細(xì)胞凋亡
    3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 Sel1L不引起T淋巴細(xì)胞活化強(qiáng)度的改變
        3.4.2 Sel1L基因敲除促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖
        3.4.3 Sel1L基因敲除促進(jìn)活化T淋巴細(xì)胞凋亡
    3.5 討論
第四章 Sel1L基因調(diào)節(jié)CD4~+T淋巴細(xì)胞分化
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)商品化試劑
        4.1.4 自配試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 胞內(nèi)因子染色檢測CD4~+T細(xì)胞壓群Th1、Th2及Th17細(xì)胞
        4.2.2 流式細(xì)胞術(shù)核染色檢測Treg細(xì)胞
        4.2.3 流式細(xì)胞術(shù)核染色檢測轉(zhuǎn)錄因子T-bet、ROR-γt
        4.2.4 Th1、Th17體外定向誘導(dǎo)分化
        4.2.5 TCR信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo)檢測
    4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 Sel1L缺失影響脾臟活化CD4~+T細(xì)胞亞群
        4.4.2 Sel1L缺失上調(diào)Th1、Th17特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet、ROR-γt
        4.4.3 Sel1L缺失促進(jìn)Th1、Th17分化
        4.4.4 Sel1L缺失激活TCR信號(hào)通路
    4.5 討論
第五章 Sel1L基因影響CD4~+T細(xì)胞UPR信號(hào)通路
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 CD4~+T細(xì)胞UPR相關(guān)蛋白檢測
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 討論
第六章 主要結(jié)論和展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章及專利申請



本文編號(hào)：3188409