組織蛋白酶L2（CathepsinL2,CatL2）存在于片形吸蟲發(fā)育的各個(gè)時(shí)期,具有潛在的免疫保護(hù)性及診斷性。為了獲得片形吸蟲"中間型"（"intermediate form"of Fasciola,Fsp）CatL2基因的重組蛋白,根據(jù)GenBank中公布的肝片形吸蟲組織蛋白酶L2基因設(shè)計(jì)特異性引物,應(yīng)用RT-PCR獲得蟲體的FspCatL2基因,經(jīng)TA克隆后,進(jìn)行測(cè)序及生物學(xué)分析;進(jìn)一步構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒PET-28a（+）-FspCatL2,在大腸桿菌Rosetta（DE3）中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),將純化后的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE和Western Blot分析。結(jié)果表明擴(kuò)增得到的FspCatL2基因的大小為933 bp,編碼311個(gè)氨基酸,生物信息學(xué)顯示FspCatL2有較多的α-螺旋,具有較好的抗原表位,推測(cè)該蛋白應(yīng)有較好的抗原性。SDS-PAGE結(jié)果顯示在35 kDa處有目的條帶,Western Blot分析發(fā)現(xiàn)重組FspCatL2與片形吸蟲"中間型"陽(yáng)性血清發(fā)生反應(yīng),而與陰性血清不發(fā)生反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)成功克隆表達(dá)了片形吸蟲"中間型"組織蛋白酶L2,為進(jìn)一步研究其功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,31(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲體與血清
    1.2 主要材料及試劑
    1.3 蟲體的分子鑒定
    1.4 引物的設(shè)計(jì)及目的基因的擴(kuò)增
    1.5 蟲體總RNA的提取及cDNA的合成
    1.6 目的基因的克隆及序列分析
    1.7 生物信息學(xué)分析
    1.8 目的蛋白最佳誘導(dǎo)條件的優(yōu)化、SDS-PAGE及Western blot分析
2 結(jié)果
    2.1 片形吸蟲“中間型”的分子鑒定
    2.2 片形吸蟲“中間型”FspCatL2基因的擴(kuò)增
    2.3 生物信息學(xué)分析
    2.4 PET-28a-FspCatL2重組質(zhì)粒的鑒定
    2.5 目的蛋白的最適誘導(dǎo)條件的優(yōu)化、SDS-PAGE及Western blot分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鼻狀杯環(huán)線蟲形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)鑒定[J]. 高遠(yuǎn),仇建華,常巧呈,高俊峰,王春仁.  黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)
[2]樺褐孔菌酸性蛋白酶基因的克隆及其生物信息分析[J]. 李健,張宇婷,安丹丹,陳艷秋.  延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2016(04)
[3]肝片吸蟲組織蛋白酶L真核表達(dá)載體構(gòu)建及重組蛋白活性分析[J]. 聞曉波,冉旭華,王春仁,宋佰芬,魏曉曼,李曉娟,王密,苗艷.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2013(01)



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