目的:在原核表達系統(tǒng)中表達沙眼衣原體CT135蛋白,并制備抗體,建立CT135蛋白免疫檢測方法。方法:將沙眼衣原體CT135基因（1083 bp）克隆入帶有His標簽的pET-32a（+）載體中,通過NdeⅠ/XhoⅠ雙酶切構建CT135全長的重組質粒WT,CT135基因N端逐漸縮短的重組質粒MT1、MT2、MT3,以及CT135基因C端逐漸縮短的重組質粒MT4、MT5、MT6,在大腸桿菌BL21（DE3）中重組表達;用Ni2+-NTA親和層析柱純化重組蛋白,然后腹腔注射5周齡BALB/c雌鼠制備抗血清。結果:Western印跡使用高靈敏的二抗通過紅外掃描系統(tǒng)檢測到所有質�？杀磉_重組蛋白,但考馬斯亮藍染色結果顯示只有MT6可高表達重組蛋白。制備純化了MT6重組蛋白,通過腹腔注射免疫法制備了小鼠抗MT6血清。結論:大腸桿菌表達系統(tǒng)中,沙眼衣原體CT135蛋白的N端片段（1～374 bp）可以獲得高表達。小鼠抗MT6血清的制備為后期檢測沙眼衣原體CT135蛋白的表達奠定了基礎。 

【文章來源】：生物技術通訊. 2020,31(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 引物設計與合成
    1.3 CT135全長重組質粒構建
    1.4 CT135基因截短重組質粒構建
    1.5 蛋白表達
        1.5.1 蛋白取樣
        1.5.2 SDS-PAGE
        1.5.3 考馬斯亮藍染色和Western印跡
    1.6 抗體制備及檢測
2 結果
    2.1 質粒構建
    2.2 蛋白表達
    2.3 多克隆抗體制備及檢測
3 討論



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