Hutchinson—Gilford早老癥（HGPS）是一種罕見(jiàn)的遺傳性疾病,其臨床特征為患者幼年時(shí)期即出現(xiàn)衰老癥狀并累及多種組織器官,包括皮膚、肌肉、骨骼以及心血管系統(tǒng)。HGPS伴發(fā)有老年人常見(jiàn)的并發(fā)癥,并最終導(dǎo)致死亡,該疾病患兒的平均壽命約13.5歲。HGPS是由于LMNA基因的點(diǎn)突變干擾了A型核纖層蛋白前體（prelamin A）翻譯后的加工過(guò)程,從而導(dǎo)致異常prelamin A在細(xì)胞核堆積的結(jié)果。Zmpste24是參與由prelamin A形成成熟的核纖層蛋白A（lamin A）過(guò)程所必須的酶。Zmpste24基因敲除小鼠具有典型的早老表現(xiàn),是目前研究細(xì)胞衰老機(jī)制的首選模型。瞬時(shí)性受體電位通道（transient receptor potential,TRP）是參與調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子平衡的一種通道,廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物的多種組織中,并參與調(diào)節(jié)例如細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、遞質(zhì)釋放、細(xì)胞分化、基因轉(zhuǎn)錄等諸多重要的生理功能。研究發(fā)現(xiàn)由早老癥患者的內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞高表達(dá)TRPV2,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,與細(xì)胞衰老密切相關(guān)。但是TRP通道對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesene... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
文獻(xiàn)回顧
實(shí)驗(yàn)一 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs的分離培養(yǎng)及干性檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 BMMSCs的分離培養(yǎng)與純化
        2.2 BMMSCs干細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定
        2.3 BMMSCs克隆形成能力的檢測(cè)（CFU-F）
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BMMSCs的分離培養(yǎng)與純化
        3.2 BMMSCs干細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定
        3.3 BMMSCs克隆形成能力的檢測(cè)
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs增殖、凋亡能力以及細(xì)胞衰老情況的檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 BMMSCs細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)
        2.2 BMMSCs凋亡水平檢測(cè)
        2.3 SA-β-gal染色檢測(cè)BMMSCs的衰老情況
        2.4 BMMSCs的細(xì)胞周期蛋白及衰老相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 BMMSCs增殖能力的檢測(cè)
        3.2 BMMSCs凋亡水平檢測(cè)
        3.3 BMMSCs的衰老情況檢測(cè)
        3.4 BMMSCs的細(xì)胞周期蛋白及衰老相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測(cè)
    4 討論
實(shí)驗(yàn)三 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs的TRP通道表達(dá)情況及與增殖凋亡相關(guān)通道的篩選
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 RT-PCR檢測(cè)兩種小鼠BMMSCs的TRP通道的表達(dá)
        2.2 影響B(tài)MMSCs細(xì)胞增殖、凋亡的TRP通道的篩選
        2.3 Western-Blot檢測(cè)兩種小鼠TRPM8通道的表達(dá)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 兩種小鼠BMMSCs的TRP通道的表達(dá)檢測(cè)
        3.2 抑制BMMSCs細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡后TRP通道的表達(dá)情況
        3.3 兩種小鼠BMMSCs的TRPM8通道的表達(dá)
    4 討論
實(shí)驗(yàn)四 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的細(xì)胞周期及氧化應(yīng)激因子的變化研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 兩種小鼠BMMSCs氧化應(yīng)激因子的表達(dá)檢測(cè)
        2.2 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的細(xì)胞周期及氧化應(yīng)激因子的變化
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 兩種小鼠BMMSCs氧化應(yīng)激因子的檢測(cè)
        3.2 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的細(xì)胞周期及氧化應(yīng)激因子的變化
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝



本文編號(hào)：3183383