目的觀察嗜肺軍團菌（LP）對RAW264.7巨噬細(xì)胞自噬流及其自噬相關(guān)因子表達(dá)水平的影響并探討其作用機制。方法活的LP和滅活的LP[感染復(fù)數(shù)（MOI）=10, 50, 100]分別處理RAW264.7巨噬細(xì)胞1、 2、 3 h,通過篩選得出MOI=50,處理2 h為其最佳作用條件。用雷帕霉素（RAPA）處理RAW264.7巨噬細(xì)胞12 h后,再加入活的和滅活的LP共培養(yǎng)2 h,并設(shè)正常對照組、 RAPA處理組、活LP組、 RAPA處理的活LP組、滅活LP組和RAPA處理的滅活LP組。用攜帶雙熒光標(biāo)記蛋白基因和微管相關(guān)蛋白1輕鏈3B（LC3B）基因的真核過表達(dá)質(zhì)粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞,監(jiān)測巨噬細(xì)胞自噬流的變化;用基因芯片在處理的最佳時間點篩選出LP影響巨噬細(xì)胞自噬的相關(guān)因子溶酶體/內(nèi)體膜跨膜蛋白封閉蛋白（CLN3）、組蛋白去乙�；�6（HDAC6）、 G蛋白信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白19（RGS19）、腫瘤壞死因子（TNF）、組織蛋白酶B （CTSB）、 GABA A型受體相關(guān)蛋白類似物2（GABARAPL2）、 P62、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）;實時熒光定... 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

不同劑量LP作用巨噬細(xì)胞后自噬流的變化(熒光顯微鏡, ×400)

LP處理巨噬細(xì)胞2 h后自噬流的變化(熒光顯微鏡, ×400)

基因芯片檢測結(jié)果顯示, 與細(xì)胞對照組相比, 滅活組上調(diào)LC3的表達(dá), 下調(diào)P62的表達(dá)(P<0.05), 活LP組下調(diào)LC3的表達(dá), 上調(diào)P62的表達(dá)(P<0.05); 與滅活LP組相比, 活LP組上調(diào)LC3的表達(dá), 下調(diào)P62的表達(dá)(P<0.05, 圖3)。2.3 活LP和滅活LP處理的巨噬細(xì)胞LC3B、 beclin1、 Keap1 mRNA水平降低P62、 Nrf2 mRNA表達(dá)水平增加


本文編號：3126082